[发明专利]一种分析测定琥珀酸曲格列汀中2-氰基-5-氟溴苄的方法

说明书

本发明提供一种分析测定琥珀酸曲格列汀中2‑氰基‑5‑氟溴苄的方法。本发明采用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以磷酸水溶液和乙腈溶液为流动相，采用梯度洗脱方式，所建立的高效液相分析方法能够准确测定琥珀酸曲格列汀中潜在基因毒性杂质2‑氰基‑5‑氟溴苄。本HPLC‑UV方法操作简单，分析时间短，准确度高，重复性好，灵敏度可达3.0ppm，为琥珀酸曲格列汀质量标准的提供了可靠检测方法，为患者的健康用药提供保障，属于医药技术领域。

技术领域

本发明属于医药领域，具体公开了一种利用HPLC法测定琥珀酸曲格列汀中潜在基因毒性杂质2-氰基-5-氟溴苄的药物分析方法。

背景技术

Trelagliptin(曲格列汀)是一种每周服药一次的二肽基肽酶IV(DPP-4)抑制剂，通过选择性、持续性抑制DPP-4，控制血糖水平。DPP-4为丝氨酸蛋白酶，能够引发肠促胰岛素(胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(GIP))的失活，而这2种肠降胰岛素在血糖调节中发挥着重要作用。抑制DPP-4，能够增加血糖水平依赖性胰岛素分泌，从而控制血糖水平。对于本药品而言，其主要成分的纯度是药品药效的决定性因素，因此在制备该药物的后续检测是十分重要的。琥珀酸曲格列汀，化学名为2-[[6-[(3R)-3-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氢-3-甲基-2,4-二氧代-1(2H)-嘧啶基]甲基]-4-氟-苯甲腈琥珀酸盐，分子式：C₁₈H₂₀FN₅O2·C₄H₆O₄主要用于治疗Ⅱ型糖料病患者，具有半衰期长的优势，一周服用一次。其结构式如下：

2-氰基-5-氟溴苄是琥珀酸曲格列汀合成过程中的重要起始物料，其结构下：

2-氰基-5-氟溴苄是具备卤代烷烃结构，此类警示结构的化合物被ICH(人用药物注册技术要求国际协调会)、FDA(美国食品药品监督管理局)和EMEA(欧洲药品审评署)定义为潜在基因毒性杂质，因此，需要在琥珀酸曲格列汀中控制2-氰基-5-氟溴苄的含量。参考ICH《人用药物遗传毒性试验和结果分析指导原则》，每天最多摄入1.5μg的基因毒性杂质，被认可为大多数药品可以接受的风险。琥珀酸曲格列汀的每周最大摄入量为100mg，为了严格控制基因毒性杂质，我们设定其每天计量为100mg，所以2-氰基-5-氟溴苄相应限度为(1.5μg/day)/(100mg/day)＝15ppm。

近年来，随着国内外药政部门相关法规的逐步健全，基因毒性杂质研究已经成为保证产品质量的关键之一。目前，USP、EP、JP和中国药典及相关文献、专利均未见琥珀酸曲格列汀基因毒性杂质2-氰基-5-氟溴苄检测方法的报道。

发明内容

本发明提供一种高效液相色谱法分析测定琥珀酸曲格列汀中潜在基因毒性杂质即2-氰基-5-氟溴苄的方法。

本发明提供一种利用HPLC法分析测定琥珀酸曲格列汀中基因毒性杂质2-氰基-5-氟溴苄的方法，该方法包括：

(1)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以磷酸水溶液为流动相A，乙腈溶液为流动相B，梯度洗脱方式；

(2)样品溶液的配置：采用乙腈水溶液作为溶剂将待检测样品配置成样品溶液；

(3)分离分析：将样品溶液注入高效液相色谱仪，完成珀酸曲格列汀基因毒性杂质的测定，其中，所述基因毒性杂质为2-氰基-5-氟溴苄。

本发明的上述方法中，其特征在于，所述固定相十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱的粒径为3.5um，长度为100mm，内径4.6mm。

本发明的上述方法中，其特征在于，步骤(2)中作为溶剂使用的乙腈溶液中乙腈浓度为20％～80％，优选50％。