[发明专利]一种脱细胞真皮材料及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种脱细胞真皮材料的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1、繁育基因编辑动物；

步骤2、采集步骤1所述动物的真皮作为原料；

步骤3、取步骤2制得的所述原料脱细胞；

步骤4、取步骤3制得的材料交联化；

其中，步骤3具体为：

浸没于0.001～1wt.％SDS溶液中6～24h，振荡频率为500～1000rpm，温度为0～40℃；

置于-40～-80℃中1～6h，置于20～40℃中1～3h，置于-20～-40℃中3～6h，置于0～30℃中1～2h；

超声波清洗，40～100KHz处理30min～6h，功率200W～1KW，温度为0～40℃；

浸没于0.01～5wt.％SDS溶液中0.5～12h，振荡频率为300～600rpm，温度为20～40℃；

超声波清洗，40～80KHz处理3～6h，功率200W～800W，温度为10～40℃；

置于-20～-60℃中30min～3h，置于20～40℃中1～2h，置于-40～-80℃中30min～3h，置于20～40℃中1～2h。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述交联化采用的交联剂包括化学交联剂和/或生物交联剂中的至少一种；

所述化学交联剂包括醛类、亚氨酸酯类、N-羟基琥珀酰亚胺酯类(NHS酯)、马来酰亚胺类、卤乙酰基类、二硫代联吡啶、酰肼类、碳二亚酰胺类中的一种或两种以上的混合物；

所述醛类包括戊二醛、甲醛、乙醛中的一种或两者的混合物；

所述生物交联剂包括原花青素、京尼平中的一种或两者的混合物；

所述交联剂的浓度为0.00001～5wt.％，所述交联化的温度为0～40℃，每次交联化的时间为0.5～12h，所述交联化的次数为1～10次。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述基因编辑包括巨型核酸酶(Meganuclease)、锌指核酸酶(ZFNs)、转录激活样效应因子核酸酶(TALEN)或成簇规律间隔短回文重复(CRISPR/Cas)系统中的至少一种。

4.如权利要求1至3任一项所述的方法，其特征在于，所述基因编辑包括基因敲除和/或基因转入；

所述基因敲除中敲除的基因包括GGTA1、CMAH、β4GalNT2或PERV中的至少一种；

基因转入中转入的基因包括hCD46、hCD55、hCD47、LEA29Y、hTBM、hTFPI或EPCR中的至少一种。

5.如权利要求1至4任一项所述的方法，其特征在于，所述动物包括猪、牛、羊、马、猴、狗、兔、鸡、鼠、蚕、鱼、海洋生物、驴中的至少一种；所述动物为基因编辑后稳定传代3代以上的动物；优选的，选用基因编辑后稳定传代5代的动物。

6.如权利要求1至5任一项所述的方法制得的脱细胞真皮材料。

7.如权利要求6所述的脱细胞真皮材料在制备组织工程材料、再生医学材料、转化医学材料中的应用。

8.组合物，其特征在于，包括如权利要求7所述的脱细胞真皮材料以及医学上可接受的辅料。