[发明专利]一种利用过氧化氢酶活性鉴别乳猪肝和成年猪肝的方法

权利要求书

1.一种利用过氧化氢酶活性鉴别乳猪肝和成年猪肝的方法，该方法由下列步骤组成：

S1，原料的准备：将冷冻的猪肝在冰水浴中隔水解冻或将其提前一夜置于4℃冰箱中自然解冻（也可直接用新鲜猪肝），用厨房纸巾抹干表面血水并剔除膜衣和结缔组织后切成合适大小；

S2，粗酶液的制取：将猪肝和pH=7.0的1%甘露醇缓冲液按1:8的料液比加入干燥洁净的组织匀浆器中，先低速开启匀浆器，之后再慢慢转至高速，以防止溶液飞溅或猪肝附着于盖子上，约30S后关闭匀浆器，将得到的溶液先置于1.5ml离心管中密封好，冰水浴10min，之后将其抹干后，用高速离心机，在10000r/min条件下离心10min，离心后取上层清液，稀释10倍后得到粗酶液，粗酶液未使用时需置于冰水浴中，防止酶活出现变化；

S3，过氧化氢酶活性的测定：在4个碘量瓶中分别加入10ml过氧化氢溶液并做好标记，置于25℃恒温水浴锅中水浴5min；先在其中一个碘量瓶中加入1ml浓硫酸，摇匀，1min后加入约50ml蒸馏水，加入三滴钼酸铵溶液，摇匀，加入足量碘化钾，摇匀后置于暗处反应5min，之后用硫代硫酸钠溶液滴定并记录数据；在剩下三个碘量瓶中各加入200ul粗酶液，准确反应3min后，加入1ml浓硫酸终止反应，摇匀，1min后加入约50ml蒸馏水，加入三滴钼酸铵溶液，摇匀，加入足量碘化钾，摇匀后置于暗处反应5min，之后用硫代硫酸钠溶液滴定并记录数据（也可采用高锰酸钾法测定过氧化氢酶活性）；测定需要三组以上，减少实验误差。

2.如权利要求1所述的利用过氧化氢酶活性鉴别乳猪肝和成年猪肝的方法，其特征在于解冻的猪肝和新鲜的猪肝都要用纸巾抹干表面血水并剔除膜衣和结缔组织。

3.如权利要求1所述的利用过氧化氢酶活性鉴别乳猪肝和成年猪肝的方法，其特征在于pH=7的1%甘露醇缓冲溶液（内含0.1mol/L的磷酸盐），配制方法为取11.82g NaH₂PO₄和19.35gNa₂HPO₄于烧杯中溶解后移入1L容量瓶中，另外称取10g甘露醇于烧杯中溶解，再倒入乘有NaH₂PO₄和Na₂HPO₄的1L容量瓶中，用蒸馏水定容。

4.如权利要求1所述的利用过氧化氢酶活性鉴别乳猪肝和成年猪肝的方法，其特征在于先将猪肝和1%甘露醇缓冲液按1:8的料液比混合，再进行匀浆。

5.如权利要求1所述的利用过氧化氢酶活性鉴别乳猪肝和成年猪肝的方法，其特征在于离心前用冰水浴冷却10min，粗酶液使用前后都置于冰水浴中。

6.如权利要求1所述的利用过氧化氢酶活性鉴别乳猪肝和成年猪肝的方法，其特征在于粗酶液要进行稀释，使用量为200μl，过氧化氢浓度为0.2mol/L,终止反应浓硫酸用量为1ml，反应时间为3min，硫代硫酸钠的浓度在0.14mol/L-0.16mol/L。

7.如权利要求1所述的利用过氧化氢酶活性鉴别乳猪肝和成年猪肝的方法，其特征在于加入浓硫酸终止反应后先加蒸馏水稀释至50ml左右，再加入浓度为30g-40g/L的钼酸铵溶液三滴。