[发明专利]一种利用过氧化氢酶活性鉴别乳猪肝和成年猪肝的方法

说明书

本发明属于酶活性检测领域，涉及一种利用过氧化氢酶活性鉴别乳猪肝和成年猪肝的方法。本发明使用浸提法从猪肝中提取过氧化氢酶，利用碘量法和高猛酸钾法测定猪肝中过氧化氢酶的活性，提供了一种准确度高、操作简便、可重复性强的鉴别成年猪肝和乳猪肝的检测方法。实验表明，在同等条件下，乳猪肝的过氧化氢酶活性要显著小于成年猪肝的过氧化氢酶活性，从而可以将猪肝中过氧化氢酶含量大小作为鉴别成年猪肝和乳猪肝的一个指标，本方法可以填补国内检测成年猪肝和乳猪猪肝方法和标准的空白，为药用乳猪肝原材料的检测提供了一种准确度高、操作简便、可重复性强的方法，具有很高的应用价值。

技术领域

本发明涉及一种利用过氧化氢酶活性鉴别乳猪肝和成年猪肝的方法，属于酶活性检测领域。

背景技术

过氧化氢酶广泛存在于动植物的各个组织、大部分需氧微生物体内，是动植物体内清除自由基的基本酶类。过氧化氢酶的作用是催化细胞内过氧化氢的分解，防止脂质、蛋白质、核酸等生物大分子的氧化损伤。目前提取过氧化氢酶的方法有发酵法和从动物组织中提取。我国生产过氧化氢酶主要还是采用从动物的组织中提取。这种方法有操作门槛低、原料来源丰富的优点。从经济效益和原料获取难度等方面来看，新鲜猪肝是提取过氧化氢酶的重要原料之一。

目前从猪肝脏中可以提取、制备肝素、猪肝酯酶、卵磷脂、肝水解肽等生化药剂，因此猪肝具有较重要的药用价值。其中促肝细胞生长素是从新鲜乳猪肝或未哺乳新生牛新鲜肝脏中提取的一种能够促进肝细胞再生的生物活性物质,实验表明，以乳猪肝为原料制备肝水解肽，与成年猪肝脏对照，考察产品活性及收率差异，结果证明乳猪肝源制品的生物活性远高于成年猪肝源制品，且含量及收率亦有所提高。从临床用药的有效性考虑，以两个月以内的乳猪肝代替成年动物肝脏制备的肝水解肽具有较高的应用价值。

从成本上考虑，成年猪肝脏比乳猪肝脏价格低，且冷藏猪肝仅凭外观难以区分。所以，可能存在企业收购的乳猪肝脏被成年猪肝脏替代的风险，但是，目前国内没有检测成年猪肝脏和乳猪肝脏的标准和方法，造成制药企业收购猪肝的质量检测空白和质量检测监督部门的监管空白。因此，研究一种准确度高、操作简便、可重复性强、适用于常规条件下操作的鉴别成年猪猪肝与2月龄前的乳猪猪肝的检测方法是很有必要的。

近年来一些科技文献公开了一些过氧化氢酶的提取和活性检测方法，如：

中国专利申请号CN201410577230.4发明名称过氧化氢酶活性的检测方法申请人 李勇;刘文斌联系地址710000陕西省西安市高新区新型工业园区创业大道6号2幢5层501、502、503室摘要本发明涉及一种过氧化氢酶活性的检测方法，属于酶活性检测方法领域。所述的过氧化氢酶活性的检测方法，包括以下步骤：将过氧化氢酶标准品稀释成一系列酶活性浓度的标准液，取10mL过氧化氯磷酸缓冲液于100mL碘量瓶中，置25℃水浴中保温，然后加入2mL酶标准液，准确保温3min，立即加入2mL0.5mol/硫酸终止反应，对照反应液对照管先加2mL0.5mol/L硫酸终止反应后加酶液。然后取上述反应液0.1mL加2.9mL过氧化物酶-邻联茴香胺溶液于测试管中摇匀，在25℃下用分光光度计在436μm处先用空白试测管调零后再测定各反应液测试管的吸光度，得到标准酶活性与吸光度关系曲线。按上述相同的方法处理测试酶，根据其吸光度与标准曲线可得到测试酶的酶活性。本发明所述的检测方法具有准确、实用性强、仪器要求简单，适用于常规条件下的操作的特点，是测定过氧化氢酶活力显色法中一种可靠方法。