[发明专利]一种用于检测钙需求相关基因SNP位点的试剂盒及应用

权利要求书

1.一种用于检测钙需求相关基因SNP位点的试剂盒，其特征在于：包括用于检测钙需求相关的GC基因RS2282679位点、IL-6基因RS1800795位点、PTH基因RS6254位点、VDR基因RS1544410位点和VDR基因RS2228570位点的引物组合物，所述引物组合物的序列为：

GC基因RS2282679位点的正反向PCR引物：SEQ ID No:1-2，正向延伸引物：SEQ ID No:11；

IL-6基因RS1800795位点正反向PCR引物：SEQ ID No:3-4，正向延伸引物：SEQ ID No:12；

PTH基因RS6254位点正反向PCR引物：SEQ ID No:5-6，正向延伸引物：SEQ ID No:13；

VDR基因RS1544410位点正反向PCR引物：SEQ ID No:7-8，正向延伸引物：SEQ ID No:14；

VDR基因RS2228570位点正反向PCR引物：SEQ ID No:9-10，正向延伸引物：SEQ ID No:15；

GC基因RS2282679位点、IL-6基因RS1800795位点、PTH基因RS6254位点、VDR基因RS1544410位点和VDR基因RS2228570位点的正向延伸引物浓度比为2:1:3:2:1；

GC基因RS2282679位点、IL-6基因RS1800795位点、PTH基因RS6254位点、VDR基因RS1544410位点和VDR基因RS2228570位点的各对正反向PCR引物浓度比为1:1:1:1:2；

正向延伸引物序列中的5’端采用不同数量的ploy T修饰；其中，GC基因RS2282679位点、IL-6基因RS1800795位点、PTH基因RS6254位点、VDR基因RS1544410位点和VDR基因RS2228570位点的正向延伸引物上的ploy T修饰数量依次为：22、16、35、29、19；

纯化后多重PCR产物、正向延伸引物组合物与多重单碱基延伸反应试剂中的SNaPshotMultiplex KitABI的体积比为2:1:1。

2.如权利要求1所述的一种用于检测钙需求相关基因SNP位点的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括以下试剂：

(1)多重PCR扩增试剂：包括dNTPs、TaqDNA聚合酶、PCR反应缓冲液、1× GC-I缓冲液、Mg²⁺：

(2)PCR产物纯化试剂：AP酶、Exol1酶、Seq buffer；

(3)多重单碱基延伸反应试剂：SNaPshot Multiplex KitABI；

(4)延伸产物纯化试剂：SAP酶；

(5)测序变性反应试剂：120Liz SIZE STANDARD内标、Hi-Di甲酰胺。

3.如权利要求1所述的一种用于检测钙需求相关基因SNP位点的试剂盒，其特征在于：纯化后的延伸产物与测序变性反应试剂中的120Liz SIZE STANDARD内标、Hi-Di甲酰胺的体积比为12:3:92。