[发明专利]细胞色素P450酶及其在合成灵芝三萜类化合物中的应用

权利要求书

1.编码细胞色素P450酶或其催化活性片段的核酸分子，其特征在于，其核苷酸序列为SEQ ID No.1或SEQ ID No.3所示。

2.一种细胞色素P450酶，其特征在于，其氨基酸序列如 SEQ ID No.2或 SEQ ID NO.4所示。

3.一种重组的宿主细胞，其特征在于，其包括编码权利要求2所述的细胞色素P450酶的异源核酸分子；

所述宿主细胞不为植物品种或动物品种。

4.根据权利要求3所述的重组的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞是原核细胞或真核细胞。

5.根据权利要求4所述的重组的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞是细菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞。

6.根据权利要求5所述的重组的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞是酵母属(Saccharomycesgenus)细胞、毕赤酵母属(Pichiagenus)细胞或大肠杆菌(Escherichiacoli)细胞。

7.权利要求1所述核酸分子或者权利要求2所述细胞色素P450酶或者权利要求3-6任一项所述的重组的宿主细胞在合成灵芝三萜类化合物中的应用；

所述灵芝三萜类化合物为式（I）或式（II）所示的化合物：

式（I）

式（II）；

其中，SEQ ID No.1所示的核酸分子或其编码的细胞色素450酶或含有该基因的宿主细胞用于合成式（I）所示的灵芝三萜类化合物；

其中，SEQ ID No.3所示的核酸分子或其编码的细胞色素450酶或含有该基因的宿主细胞用于合成式（II）所示的灵芝三萜类化合物。

8.一种灵芝三萜类化合物的合成方法，其特征在于，包括：将权利要求2所述细胞色素P450酶与灵芝酸HLDOA接触，生成灵芝三萜类化合物；

所述灵芝三萜类化合物为式（I）或式（II）所示的化合物：

式（I）

式（II）。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述合成方法为异源生物合成方法。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述细胞色素P450酶通过培养重组的宿主细胞进行表达，所述重组的宿主细胞包括编码权利要求2所述的细胞色素P450酶的异源核酸分子；

培养所述重组的宿主细胞，表达细胞色素P450酶，并催化灵芝酸HLDOA生成所述灵芝三萜类化合物；

所述重组的宿主细胞为重组的酿酒酵母，通过发酵方式培养所述酿酒酵母，从发酵液中分离所述灵芝三萜类化合物。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述重组的酿酒酵母发酵用的发酵培养基为YPD24发酵培养基，所述培养基含有遗传霉素G418和潮霉素（Hygromycin）。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基中，遗传霉素G418的浓度为200~800mg/L，潮霉素（Hygromycin）的浓度为100~500mg/L。

13.根据权利要求10-12任一项所述的方法，其特征在于，发酵的温度为20-40℃。