[发明专利]利用高效液相色谱法检测GLP-1或其类似物的方法

说明书

本发明属于GLP‑1检测技术领域，涉及一种利用高效液相色谱法检测GLP‑1或其类似物的方法。该方法使用流动相A和流动相B对含有GLP‑1或GLP‑1类似物的样品进行洗脱，所述流动相A为含有硫酸钠的乙腈水溶液，流动相B为乙腈水溶液。本发明提供的方法通过设置特定的流动相，可以减小基线波动，从而提高检测灵敏度，提高主峰和杂质的分离效果，更有效地控制GLP‑1产品或GLP‑1类似物产品的质量。

技术领域

本发明涉及GLP-1检测技术领域，具体涉及一种利用高效液相色谱法检测GLP-1或其类似物的方法。

背景技术

胰高血糖素样肽-1(本发明简称GLP-1)是一种由胃肠内分泌细胞产生的肽类物质，属于一种肠促胰岛素，能够通过多种途径来控制血糖。重组GLP-1为GLP-1类似物，在生产及储存过程中会产生多种产品相关杂质，较难分离。

目前用于检测多肽类物质的流动相多为三氟乙酸体系，三氟乙酸流动相的主要缺陷是基线波动大，导致灵敏度低，不易检测到含量较小的杂质。并且在以三氟乙酸为流动相分离GLP-1或GLP-1类似物时，包含的杂质较多，分离效果不理想，无法很好的控制产品的质量。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种利用高效液相色谱法(本发明简称HPLC)检测GLP-1或其类似物的方法，以减小基线波动，从而提高检测方法的灵敏度，提高主峰和杂质的分离效果，更有效地控制GLP-1产品或GLP-1类似物产品的质量。

本发明提供一种利用HPLC检测GLP-1或其类似物的方法，该方法使用流动相A和流动相B对含有GLP-1或GLP-1类似物的样品进行洗脱，所述流动相A由钠盐溶液和有机溶剂组成，流动相B由有机溶剂和水溶液组成；其中钠盐选自硫酸钠、氯化钠、乙酸钠和磷酸钠溶液中的一种或两种，有机溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇和乙腈中的一种或两种。

作为本发明的优选实施方案，所述流动相A中的钠盐为硫酸钠，所述流动相A中硫酸钠的浓度为10～50g/L，优选为15～40g/L，进一步优选为20～35g/L，更优选为23～28g/L，更优选为25～26g/L。本发明通过优化硫酸钠在流动相A中的比例，降低基线波动，提高检测GLP-1或GLP-1类似物的灵敏度，提高GLP-1产品或GLP-1类似物主峰与杂质的分离度。

作为本发明的优选实施方案，所述流动相A中的有机溶剂为乙腈，所述流动相A中乙腈的体积百分比为5％～20％，优选为10％～15％，例如10％。通过优化乙腈在流动相A中的比例，降低基线波动，提高检测GLP-1或GLP-1类似物的灵敏度，提高GLP-1产品或GLP-1类似物主峰与杂质的分离度。

作为本发明的优选实施方案，所述流动相A的pH值为2.0～4.5，优选为2.5～3.5，更优选为3。缓冲液缓冲能力强，能够提供稳定的pH，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形。

作为本发明的优选实施方案，所述流动相A的pH值的调节剂为磷酸缓冲溶液。

作为本发明的优选实施方案，所述流动相B中有机溶剂为乙腈，所述流动相B中乙腈的体积分数为60％～80％，优选为70％。通过优化乙腈在流动相B中的比例，降低基线波动，提高检测GLP-1或GLP-1类似物的灵敏度，提高GLP-1产品或GLP-1类似物主峰与杂质的分离度。

作为本发明的优选实施方案，所述洗脱为梯度洗脱。

作为本发明的更优选实施方案，所述梯度洗脱的方式为：以流动相A和流动相B的总体积为100％，所述流动相A所占的体积百分比由80％递减至30％，余量为流动相B。