[发明专利]一种特异性扩增RNA的引物、其设计方法及用途

权利要求书

1.一种以RNA为模板的反转录引物，其由RNA模板互补部分和人为引入的错配部分组成；优选地，所述引物长度为20-70bp，GC含量为20％-80％，Tm值为65℃-70℃，不存在任何发夹结构；优选地，所述模板互补部分长度为6bp-25bp，GC含量为20％-80％，Tm值为25℃-45℃，不存在任何发夹结构；优选地，所述错配部分长度为5bp-64bp，GC含量为20％-80％，Tm值为30℃-70℃，不存在任何发夹结构。

2.权利要求1的引物，其中所述RNA模板互补部分与RNA模板完全互补，不存在任何错配碱基；或者所述RNA模板互补部分与RNA模板非完全互补，可存在错配碱基，但错配碱基不存在于所述引物3’端的5个碱基中。

3.权利要求2的引物，其中所述错配部分与RNA模板完全错配，在对应碱基位置上不存在任何单独或连续的互补碱基；或者，所述错配部分与RNA模板不完全错配，在对应碱基位置上可存在单独或连续的互补碱基，但互补碱基总数不超过错配部分碱基总数的40％；优选地，所述引物序列为SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4。

4.权利要求3的引物，其中所述反转录引物还包含长度为3bp-20bp的连接用碱基；特别地，所述连接用碱基可以具有其他特殊用途；优选地，所述引物序列为SEQ ID NO：6或SEQID NO：10。

5.权利要求3或4的引物，其中所述反转录引物还包含分别位于所述错配部分两侧的保护碱基部分和保护碱基互补部分，所述保护碱基部分长度为4bp-8bp且与RNA模板完全错配，保护碱基部分与保护碱基互补部分为反向互补结构，其在50℃-55℃的退火温度下能够退火结合。

6.权利要求5的引物，其序列为SEQ ID NO：14。

7.一种设计并获得权利要求1-6中任一项所述引物的方法，包括以下设计步骤：设计引物，使其由RNA模板互补部分和人为引入的错配部分组成。

8.权利要求1-6中任一项所述引物用于区分DNA模板和RNA模板，实现RNA特异性扩增的用途，所述DNA模板和RNA模板存在于同一样品中或不同样品中。

9.一种在同时存在DNA和RNA的样品中特异性扩增RNA的方法，包括使用权利要求1-6中任一项所述引物进行RT-PCR。

10.一种RT-PCR试剂盒，其包含权利要求1-6中任一项所述引物。