[发明专利]一种羌活中紫花前胡苷单体的分离纯化方法

权利要求书

1.一种羌活中紫花前胡苷单体的分离纯化方法，以羌活的根茎为原料，其特征在于，包括以下步骤：

a、超声提取

将羌活根茎粉碎成1-5mm粒径的粗粉，按照体积比质量ml/g加入5-10倍体积的50%-95%乙醇溶液，超声提取3-5次，1-2h/次，合并提取液，将乙醇溶剂回收，提取得到浓缩液；

b、二氯甲烷萃取

在步骤a所得的浓缩液中加入等体积的二氯甲烷，萃取2-4次，分取萃取下层溶液，得到提取液，再次在提取液中加入等体积正丁醇，萃取3-5次，合并正丁醇溶液，浓缩至干，得到固体提取物；

c、溶解过滤

在步骤b所得的固体提取物中，按照体积比质量ml/g，加入5-10倍体积的甲醇，溶解过滤，通过0.45um滤膜过滤，得到制备溶液Ⅰ；

d、液相-质谱分析

将步骤c中的制备溶液Ⅰ取样1-5ul，进行高效液相质谱分析：

色谱柱填料：C18填料，粒径：1-5um；

流动相为甲醇：水溶液V/V=45：55，柱温：35-38℃，流速：1.0-1.2ml/min，进行在线液相-质谱分析，得出与紫花前胡苷单体相同分子量的峰型和出峰位置；

e、高效制备液相色谱分离

将步骤c所得的制备溶液Ⅰ，根据步骤d中得出的紫花前胡苷单体的峰型和出峰位置，用制备液相色谱分离：

色谱柱填料：C18填料，粒径：5-12um；

流动相为甲醇：水溶液V/V=45：55，柱温：35-38℃，流速：50-300ml/min；

对制备液相色谱分离液，通过HPLC紫外检测器监测，检测波长为335nm，收集目标化合物制备溶液，得到制备溶液Ⅱ；

f、产品收集

将步骤e所得的制备溶液Ⅱ，回收流动相，浓缩至0.1-0.2倍体积提取物；

g、产品重结晶

将步骤f浓缩的提取物，在0-4℃低温放置2-4h，析出结晶体，过滤、烘干，即得高纯度紫花前胡苷单体；

h、反相分析型高效液相色谱法纯度检验

对步骤g中的高纯度紫花前胡苷单体，通过分析型高效液相色谱检验：

色谱柱填料：C18填料；

流动相为乙腈：水溶液V/V=30：70，柱温：35-38℃，流速：1.0-1.2ml/min，检测波长为335nm。

2.根据权利要求1所述的一种羌活中紫花前胡苷单体的分离纯化方法，其特征在于：在步骤d中，所述质谱分析采用ESI离子源，正扫描模式，显示分子量段为200-1000。