[发明专利]一种铜离子标记的用于检测内毒素的胶体金试纸条及其制备和检测方法

权利要求书

1.一种铜离子标记的用于检测内毒素的胶体金试纸条，其特征在于，所述的试纸条包括底板以及依次搭接固定于底板上的样品垫、连接垫、硝酸纤维素 膜和吸收垫；

所述的连接垫固定有铜离子标记的胶体金探针；所述的硝酸纤维素 膜上设置有检测线和质控线；所述的检测线固定有适配体捕获探针；所述的质控线固定有链霉亲和素；

所述胶体金探针按如下方法制备：

首先通过柠檬酸钠还原法制备金纳米粒子，然后在金纳米粒子的表面修饰上半胱胺分子，将复合溶液以8000rpm的转速离心10min，去除游离的半胱胺分子，最后加入铜离子标准溶液，促使金纳米粒子发生团聚，同样以8000rpm的转速离心10min，去除未吸附的铜离子，丢弃上清液，得到铜离子标记的胶体金探针；

所述的金纳米粒子、半胱胺分子、铜离子的摩尔比为150:1:1.5。

2.如权利要求1所述的铜离子标记的用于检测内毒素的胶体金试纸条，其特征在于，所述适配体捕获探针为5’端生物素修饰的适配体，再通过链霉亲和素固定，共同形成的适配体-生物素-链霉亲和素结构。

3.如权利要求1所述的铜离子标记的用于检测内毒素的胶体金试纸条，其特征在于，所述样品垫、连接垫、硝酸纤维素 膜和吸收垫相互重叠2～3mm，检测线和质控线的间隔为3～6mm，底板宽度为4mm。

4.如权利要求2所述的铜离子标记的用于检测内毒素的胶体金试纸条，其特征在于，所述适配体的序列为5’-CTTCTGCCCGCCTCCTTCC-TAGCCGGATCGCGCTGGCCAGATGATATAAAGGGTCAGCCCCCCA-GGAGACGAGATAGGCGGACACT-3’。

5.如权利要求1所述的铜离子标记的用于检测内毒素的胶体金试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：制备样品垫；

S2：制备连接垫：并将铜离子标记的胶体金探针固定在连接垫上，并在室温下干燥；

S3：硝酸纤维素 膜的处理：通过三维划膜喷金仪将适配体捕获探针和链霉亲和素固定在硝酸纤维素膜上得到检测线和质控线；

S4：试纸条的组装：将所述的样品垫、连接垫、硝酸纤维素膜和吸收垫依次固定在所述底板上，得到铜离子标记的用于检测内毒素的胶体金试纸条。

6.如权利要求5所述的铜离子标记的用于检测内毒素的胶体金试纸条的制备方法，其特征在于，所述S1的步骤具体为：将玻璃纤维于含有0.25％的聚乙二醇辛基苯基醚、0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷、5％吐温-20和0.15mol/L氯化钠的缓冲溶液pH＝8.0中浸泡1h，然后在室温下干燥并储存于干燥器中。

7.权利要求1-4任一项所述的铜离子标记的用于检测内毒素的胶体金试纸条检测内毒素的方法，包括步骤如下：

(1)将待测样品分散于磷酸盐缓冲溶液中得到待测液；

(2)将待测液滴加在样品垫上，在0.5～2min后得到试纸显色结果；检测线和质控线均显红色，待测样品中含有内毒素；检测线无色，质控线显红色，待测样品中无内毒素。

8.如权利要求7所述的检测内毒素的方法，其特征在于，所述的磷酸盐缓冲溶 液的浓度为0.005～0.015mol/L。