[发明专利]一种铜离子标记的用于检测内毒素的胶体金试纸条及其制备和检测方法

说明书

本发明涉及一种铜离子标记的用于检测内毒素的胶体金试纸条及其制备和检测方法。一种铜离子标记的用于检测内毒素的胶体金试纸条，所述的试纸条包括底板以及依次搭接固定于底板上的样品垫、连接垫、硝酸纤维膜和吸收垫；所述的连接垫固定有铜离子标记的胶体金探针；所述的硝酸纤维膜上设置有检测线和质控线；所述的检测线固定有适配体捕获探针；所述的质控线固定有链霉亲和素；本发明同时公开了一种采用上述铜离子标记的胶体金试纸条检测内毒素的方法。本发明通过铜离子介导的金纳米颗粒聚集体和亲和性高的适配体作为检测探针和捕获探针，与传统的胶体金试纸条相对比特异性强、检测限低、灵敏度高，显色效果好。

技术领域

本发明涉及一种铜离子标记的用于检测内毒素的胶体金试纸条及其制备和检测方法，属于生物化学检测技术领域。

背景技术

内毒素是革兰氏阴性菌外膜的组成成分之一，微量内毒素可以引起体温升高和一系列有害症状，如腹泻、哮喘、血管内凝血及感染性休克等。因此，快速、灵敏的检测内毒素对食品安全及医疗用品至关重要。

传统的检测内毒素的方法多基于鲎试验法和家兔热源检查法，但这两种方法主要是通过酶催化反应，因此测定结果易受到酶的影响，从而导致测试结果不准确，同时灵敏度低、检测限高、检测耗时长。近年来，生物传感器引起了广泛的关注。例如，多肽生物传感器、蛋白生物传感器、抗体生物传感器以及适配体生物传感器，可以特异性识别内毒素分子，虽然这些传感器在一定程度上改善了灵敏度、降低了检测限，但存在检测较为复杂、特异性不强、耗时长以及成本高等缺点，同时专业性要求很高，对于非专业的人很难操作，局限于实验室研究，尚未应用于现场快速检测。

中国专利文献CN104698159A公开了一种内毒素含量的检测方法，包括以下步骤：S1配制至少五个含不同浓度的内毒素标准液；S2将鲎试剂稀释液分别与每个内毒素标准液按比例混合；S3分别对每个混合液采用血栓弹力图仪检测弹力达到0.1振幅时所需的时间，并绘制时间-内毒素浓度的双对数图，得出标准曲线图；S4将鲎试剂稀释液与待测样品液按照特定比例混合，随后采用血栓弹力图仪检测弹力达到0.1振幅时所需的时间，并与标准曲线图对比，从而得出待测样品液中的内毒素含量。但是该方法依然存在操作繁琐复杂，检测耗时长的缺点。

中国专利文献CN105116142A公开了一种新型细菌内毒素检测试纸及检测方法，Phos-tag结合内毒素的磷酸基团，多粘菌素B与内毒素的类脂肪A相结合，可以快速、方便、及时检测，但是该专利的具有检测试纸特异性不强的问题。

目前，基于铜离子标记的胶体金探针和适配体为捕获探针的试纸条未见报道。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种铜离子标记的用于检测内毒素的胶体金试纸条及其制备和检测方法，该试纸条通过铜离子介导的金纳米颗粒聚集体在检测线(T线)上产生一个红色色带，由标记物显色来检测内毒素，不需要专业人员检测，操作快速简便，结果准确可靠、形象直观。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种铜离子标记的用于检测内毒素的胶体金试纸条，所述的试纸条包括底板以及依次搭接固定于底板上的样品垫、连接垫、硝酸纤维膜和吸收垫；

所述的连接垫固定有铜离子标记的胶体金探针；所述的硝酸纤维膜上设置有检测线和质控线；所述的检测线固定有适配体捕获探针；所述的质控线固定有链霉亲和素。

根据本发明优选的，所述的适配体捕获探针为5’端生物素修饰的适配体，再通过链霉亲和素固定，共同形成的适配体-生物素-链霉亲和素结构。

根据本发明优选的，所述的样品垫、连接垫、硝酸纤维膜和吸收垫相互重叠2～3mm，检测线和质控线的间隔为3～6mm，底板宽度为4mm。