[发明专利]一种脂联素测定试剂及制备方法

权利要求书

1.一种脂联素测定试剂，其特征在于，包括以下组分：

第一试剂，包括第一磷酸盐、氯化钠和聚乙二醇；

第二试剂，包括第二磷酸盐、氯化钠、海藻糖、丙三醇、表面活性剂和乳胶颗粒，所述乳胶颗粒包被脂联素抗体。

2.根据权利要求1所述的脂联素测定试剂，其特征在于，所述第一磷酸盐和第二磷酸盐的浓度分别为15～50mmol/L和30～100mmol/L，所述第一磷酸盐包括磷酸氢钠和碳酸氢钠，二者质量比为10:1～3，所述第二磷酸盐包括磷酸二氢钾和次氯酸钾，二者质量比为10:0.5～2，所述表面活性剂为山梨醇，质量分数为1～10％。

3.根据权利要求1所述的脂联素测定试剂，其特征在于，所述第一试剂和所述第二试剂的所述氯化钠的浓度均为1～20g/L，所述聚乙二醇的浓度为10～50g/L，所述海藻糖的浓度为5～10g/L，所述丙三醇的质量分数为1～10％，所述乳胶颗粒的质量分数为0.1～1％。

4.根据权利要求1～3任意一项所述的脂联素测定试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将第一磷酸盐、氯化钠和聚乙二醇溶于蒸馏水，混合均匀，定容，得第一试剂；

(2)制备包被脂联素抗体的胶乳，将所述第二磷酸盐和氯化钠溶于蒸馏水，得混合溶液，调节所述混合溶液的温度至20～50℃，向所述混合溶液中持续通入二氧化碳，搅拌1～2h，利用所述混合溶液清洗所述乳胶；

(3)向所述混合溶液中加入海藻糖、丙三醇和表面活性剂，混合均匀，蒸馏浓缩，得第二试剂。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的制备包被脂联素抗体的胶乳的步骤包括：

(1)准备粒径为50～300nm的羧基乳胶微球，加入2-吗啉乙磺酸，混合均匀，重复多次离心除上清液，得清洗胶乳；

(2)向所述清洗胶乳中加入2-吗啉乙磺酸，执行水浴超声使微球呈单分散状态，再加入活性剂活化胶乳，震荡反应10～20min，得活化乳胶；

(3)对所述活化乳胶离心，去除上清液，加入第三磷酸盐重悬微球，离心，去除上清液，再加入第三磷酸盐重悬微球，水浴超声使微球呈单分散状态，得乳胶微球溶液；

(4)将所述脂联素抗体溶液逐滴加入到所述乳胶微球溶液中，震荡反应2h，再加入终止液继续震荡反应30min，离心去除上清液后再加入封闭液继续震荡反应30min，得偶联抗体胶乳；

(5)将所述偶联抗体乳胶离心去除上清液，加入第三磷酸盐重悬微球，再水浴超声使微球为单分散状态，即得所述胶乳。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述2-吗啉乙磺酸的溶液浓度均为30～60mmol/L，pH＝6.0。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述活性剂为碳化亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，二者的质量比为1:1。

8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述终止液为50-100mg/mL的乙醇胺、赖氨酸或甘氨酸溶液，所述封闭液为5-35mg/mL的牛血清蛋白。

9.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述水浴超声均为循环执行超声2s和停止2s，所述水浴超声的持续时间为2～5min，所述超声采用40～50Hz进行。

10.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述第三磷酸盐为磷酸氢钾、硫化钾和吐温-20，三者的质量比为50:1～5:0.2～1。