[发明专利]一种脂联素测定试剂及制备方法

说明书

本发明公开了一种脂联素测定试剂，包括：第一试剂，包括第一磷酸盐、氯化钠和聚乙二醇；第二试剂，包括第二磷酸盐、氯化钠、海藻糖、丙三醇、表面活性剂和乳胶颗粒，所述乳胶颗粒包被脂联素抗体。试剂分为第一试剂和第二试剂，且第一试剂和第二试剂采用不同的磷酸盐，提高了试剂的灵敏度，海藻糖、丙三醇和表面活性剂提高了脂联素测定试剂的稳定性。上述脂联素测定试剂的制备方法，包括以下步骤：(1)将第一磷酸盐、氯化钠和聚乙二醇溶于蒸馏水，混合均匀，得第一试剂；(2)将所述第二磷酸盐、氯化钠溶于蒸馏水，调节温度至20～50℃，持续通入二氧化碳，搅拌1～2h，用来清洗乳胶；(3)加入海藻糖、丙三醇和表面活性剂，得第二试剂。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，特别是涉及一种脂联素测定试剂及制备方法。

背景技术

脂联素测定试剂盒用于体外定量检测血清、血浆中的脂联素含量，临床上用于评估2型糖尿病和心血管疾病的风险。

脂联素常用的检测方法有：放射免疫法(RIA)、酶联免疫法(ELISA)、胶乳颗粒增强免疫比浊(PETIA)等方法，其中胶乳颗粒增强免疫比浊法应用最为广泛。脂联素试剂一般分为试剂R1和试剂R2，通过两种试剂获得样本中的脂联素含量。

现有的胶乳颗粒增强免疫比浊法多为简单地将抗体与聚苯乙烯乳胶微球交联，灵敏度较低。

发明内容

本发明的一个目的在于提出一种测量灵敏度高的脂联素测定试剂。

一种脂联素测定试剂，包括以下组分：

第一试剂，包括第一磷酸盐、氯化钠和聚乙二醇；

第二试剂，包括第二磷酸盐、氯化钠、海藻糖、丙三醇、表面活性剂和乳胶颗粒，所述乳胶颗粒包被脂联素抗体。

本发明的有益效果是：试剂分为第一试剂和第二试剂，其中乳胶颗粒位于第二试剂中，且第一试剂和第二试剂采用不同的磷酸盐，提高了试剂的灵敏度，海藻糖、丙三醇和表面活性剂提高了脂联素测定试剂的稳定性。

另外，根据本发明提供的脂联素测定试剂，还可以具有如下附加的技术特征：

进一步地，所述第一磷酸盐和第二磷酸盐的浓度分别为15～50mmol/L和30～100mmol/L，所述第一磷酸盐包括磷酸氢钠和碳酸氢钠，二者质量比为10:1～3，所述第二磷酸盐包括磷酸二氢钾和次氯酸钾，二者质量比为10:0.5～2，所述表面活性剂为山梨醇，质量分数为1～10％。

进一步地，所述第一试剂和所述第二试剂的所述氯化钠的浓度均为1～20g/L，所述聚乙二醇的浓度为10～50g/L，所述海藻糖的浓度为5～10g/L，所述丙三醇的质量分数为1～10％，所述乳胶颗粒的质量分数为0.1～1％。

本发明的另一个目的在于提出一种采用上述脂联素测定试剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)将第一磷酸盐、氯化钠和聚乙二醇溶于蒸馏水，混合均匀，定容，得第一试剂；

(2)制备包被脂联素抗体的胶乳，将所述第二磷酸盐和氯化钠溶于蒸馏水，得混合溶液，调节所述混合溶液的温度至20～50℃，向所述混合溶液中持续通入二氧化碳，搅拌1～2h，利用所述混合溶液清洗所述乳胶；

(3)向所述混合溶液中加入海藻糖、丙三醇和表面活性剂，混合均匀，蒸馏浓缩，得第二试剂。

进一步地，所述步骤(2)中的制备包被脂联素抗体的胶乳的步骤包括：

i.准备粒径为50～300nm的羧基乳胶微球，加入2-吗啉乙磺酸，混合均匀，重复多次离心除上清液，得清洗胶乳；

ii.向所述清洗胶乳中加入2-吗啉乙磺酸，执行水浴超声使微球呈单分散状态，再加入活性剂活化胶乳，震荡反应10～20min，得活化乳胶；