[发明专利]一种检测PRRSV和PCV的引物组合物、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种检测PRRSV和PCV的引物组合物，其特征在于，所述引物组合物包括2组特异性引物和探针，其中第一组特异性引物和探针包括PCV-F3，PCV-B3，PCV-FIP，PCV-BIP，以及PCV-Probe，第二组特异性引物和探针包括PRRSV-F3，PRRSV-B3，PRRSV-FIP，PRRSV-BIP，以及PRRSV-probe，所述第一组和第二组特异性引物和探针依次为序列表中SEQ ID No.1至SEQID No.10所示核苷酸序列，或为将所述序列表中SEQ ID No.1至SEQ ID No.10所示的核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与所述序列表中所示的核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列；所述PCV-probe的5’端标记CY 5.5荧光基团，3’端标记BHQ2淬灭基团，该CY 5.5荧光基团在690nm波长下呈红色；所述PRRSV-probe的5’端标记FAM荧光基团，3’端标记BHQ1淬灭基团，该FAM荧光基团在520nm波长下呈绿色。

2.一种检测PRRSV和PCV的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求1所述的引物组合物。

3.根据权利要求2所述的检测PRRSV和PCV的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中内引物PRRSV-FIP、PRRSV-BIP、PCV-FIP、PCV-BIP，外引物PRRSV-F3、PRRSV-B3、PCV-B3、PCV-F3和探针PRRSV-Probe、PCV-Probe的浓度比为80：10：1。

4.根据权利要求2或3所述的检测PRRSV和PCV的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的每25ul反应体系中包括模板RNA/DNA2μL，2×缓冲液12.5μL，Bst 3.0DNA聚合酶320U,内引物PRRSV-FIP、PRRSV-BIP、PCV-FIP和PCV-BIP各40pmol，外引物PRRSV-F3、PRRSV-B3、PCV-B3和PCV-F3各5pmol，探针PRRSV-Probe和PCV-Probe各0.5pmol，加双蒸水补足至25μL；所述2×缓冲液成分为100mMKCl，200mM pH8.8的Tris–HCl，100mM(NH₄)₂SO₄，80mMMgSO₄，8Mbetaine，1％Tween-20，14mMdNTPs。

5.一种检测猪PRRSV和PCV的方法，其特征在于，采用权利要求1-4任一项所述的引物组合物或试剂盒进行环介导等温扩增反应。

6.根据权利要求5所述的检测PRRSV和PCV的方法，其特征在于，所述环介导等温扩增反应的反应体系中内引物PRRSV-FIP、PRRSV-BIP、PCV-FIP、PCV-BIP，外引物PRRSV-F3、PRRSV-B3、PCV-B3、PCV-F3和探针PRRSV-Probe、PCV-Probe的浓度比为80：10：1。

7.根据权利要求5或6所述的检测PRRSV和PCV的方法，其特征在于，所述环介导等温扩增反应的反应体系为每25ul反应体系中包括模板RNA/DNA2μL，2×缓冲液12.5μL，Bst3.0DNA聚合酶320U,内引物PRRSV-FIP、PRRSV-BIP、PCV-FIP和PCV-BIP各40pmol，外引物PRRSV-F3、PRRSV-B3、PCV-B3和PCV-F3各5pmol，探针PRRSV-Probe和PCV-Probe各0.5pmol，加双蒸水补足至25μL；所述2×缓冲液成分为100mMKCl，200mM pH8.8的Tris–HCl，100mM(NH₄)₂SO₄，80mMMgSO₄，8Mbetaine，1％Tween-20，14mMdNTPs。

8.根据权利要求5或6所述的检测PRRSV和PCV的方法，其特征在于，所述环介导等温扩增反应的反应过程包括62℃反应90分钟，85℃5分钟。

9.权利要求1所述的检测PRRSV和PCV的引物组合物、权利要求2-4任一项所述的检测PRRSV和PCV的试剂盒、权利要求5-8任一项所述的检测PRRSV和PCV的方法在同时检测猪蓝耳病和猪圆环病毒病中的应用。