[发明专利]一种检测PRRSV和PCV的引物组合物、试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种检测PRRSV和PCV的引物组合物、试剂盒及方法。本发明设计筛选出的引物组合物包括2组特异性引物和探针，在本发明优选的反应体系和反应条件下，能够在同一反应管中同时鉴别检测猪蓝耳病和猪圆环病毒病，具有特异性好、灵敏度高、方便快捷等特点。

技术领域

本申请涉及病毒检测技术领域，具体而言，涉及一种检测PRRSV和PCV的引物组合物、试剂盒及方法。

背景技术

猪繁殖与呼吸障碍综合症(porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒(porcine reproductive and respiratorysyndrome viruses，PRRSV)引起的一种猪急性传染病，俗称猪蓝耳病，病猪表现为食欲不振，体温升高，以耳根和腹部发红为明显特征，发病率和死亡率极高，该病对猪的危害性极大，引起极大的经济损失。

猪圆环病毒病(porcine circovirus disease,PCVD))是由猪圆环病毒Ⅱ型(porcine circovirus 2,PCV-2)引起的一种猪传染病，病猪以早期淋巴结肿大，食欲不振，呼吸困难，腹泻，早产及死胎等为特征，发病率20％-60％和死亡率5％-35％。

PRRSV和PCV-2引起的PRRS和PCVD是猪两种很常见的疫病，临床上还常常有PRRSV和PCV混合感染的报道，而且两种病引起猪的临床症状有时很相似，共同的症状表现为体温升高、急性死亡、怀孕母猪流产或死胎等，单靠临床诊断很难作出判断，需要借助实验室才能进行确诊。

目前实验室诊断这两种病的方法常见的有病原分离鉴定、PCR方法、荧光定量PCR方法、ELISA方法、LAMP方法和GeXP方法等，但是这些方法都各有优点与缺点。病原分离鉴定耗时长、繁琐，PCR方法需要电泳才能得结果，ELISA方法检病原不够敏感，荧光定量PCR方法和GeXP方法需要昂贵的仪器设备，而单重LAMP方法也只能检一种病原体。

发明内容

本发明提供了一种检测PRRSV和PCV的引物组合物，该引物组合物包括2组特异性引物和探针，其中第一组特异性引物和探针包括PCV-F3，PCV-B3，PCV-FIP，PCV-BIP，以及PCV-Probe，第二组特异性引物和探针包括PRRSV-F3，PRRSV-B3，PRRSV-FIP，PRRSV-BIP，以及PRRSV-probe，第一组和第二组特异性引物和探针依次为序列表中SEQ ID No.1至SEQ IDNo.10所示核苷酸序列，或为将序列表中SEQ ID No.1至SEQ ID No.10所示的核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列表中所示的核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列；PCV-probe的5’端标记CY 5.5荧光基团，3’端标记BHQ2淬灭基团，该CY 5.5荧光基团在690nm波长下呈红色；PRRSV-probe的5’端标记FAM荧光基团，3’端标记BHQ1淬灭基团，该FAM荧光基团在520nm波长下呈绿色。

本发明还提供了一种检测PRRSV和PCV的试剂盒,该试剂盒包括前述的引物组合物。

进一步的，试剂盒中内引物(PRRSV-FIP、PRRSV-BIP、PCV-FIP、PCV-BIP)，外引物(PRRSV-F3、PRRSV-B3、PCV-B3、PCV-F3)和探针Probe(PRRSV-Probe、PCV-Probe)的浓度比为80：10：1。