[发明专利]幽门螺旋杆菌分型与耐药检测的扩增和测序引物及试剂盒

权利要求书

1.幽门螺旋杆菌分型与耐药突变检测的扩增和测序的引物，其特征在于：优化PCR引物设计的基础上，能在相同条件反应下一次性进行11个聚合酶链反应,完成HP基因目的序列的扩增；并能通过测序引物进行相关基因编码区所有11个序列测序，包括UreA的扩增和测序引物为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2，16S rRNA的扩增和测序引物为SEQ ID NO.3和SEQID NO.4，rdxA的扩增和测序引物为SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6，23S rRNA的扩增和测序引物为SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8，gyrA的扩增和测序引物为SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10，PBP1的扩增和测序引物为SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12，cagA的扩增和测序引物为SEQ IDNO.13和SEQ ID NO.14，vacAs的扩增和测序引物为SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16，vacAm的扩增和测序引物为SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18，vacAi的扩增和测序引物为SEQ IDNO.19和SEQ ID NO.20，vacAii的扩增和测序引物为SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.22。

2.幽门螺旋杆菌分型与耐药突变检测的扩增和测序试剂盒，由下列试剂组成：

试剂A：由2mL缓冲液组成，包含 Green I染料，0.2mM dNTPs、80mM Tris-HCl、80mMKCl、40mM(NH4)2SO4、6mM MgSO4、100U Taq DNA聚合酶；

试剂H1：由针对UreA的测序引物30μL水溶液，包含4μM SEQ ID NO.1；

试剂H2：由针对16S rRNA的测序引物30μL水溶液，包含4μM SEQ ID NO.3；

试剂H3：由针对rdxA的测序引物30μL水溶液，包含4μM SEQ ID NO.5；

试剂H4：由针对23S rRNA的测序引物30μL水溶液，包含4μM SEQ ID NO.7；

试剂H5：由针对gyrA的测序引物30μL水溶液，包含4μM SEQ ID NO.9；

试剂H6：由针对PBP1的测序引物30μL水溶液，包含4μM SEQ ID NO.11；

试剂H7：由针对cagA的测序引物30μL水溶液，包含4μM SEQ ID NO.13；

试剂H8：由针对vacAs的测序引物30μL水溶液，包含4μM SEQ ID NO.15；

试剂H9：由针对vacAm的测序引物30μL水溶液，包含4μM SEQ ID NO.17；

试剂H10：由针对vacAi的测序引物30μL水溶液，包含4μM SEQ ID NO.19；

试剂H11：由针对vacAii的测序引物30μL水溶液，包含4μM SEQ ID NO.21；

包被引物的PCR反应管：

一号反应管：含有针对UreA的扩增引物混合组成，包含1.5×10^-2nmol SEQ ID NO.1和1.5×10^-2nmol SEQ ID NO.2；

二号反应管：含有针对16S rRNA的扩增引物混合组成，包含1.5×10^-2nmol SEQ IDNO.3和1.5×10^-2nmol SEQ ID NO.4；

三号反应管：含有针对rdxA的扩增引物混合组成，包含1.5×10^-2nmol SEQ ID NO.5和1.5×10^-2nmol SEQ ID NO.6；

四号反应管：含有针对23S rRNA的扩增引物混合组成，包含1.5×10^-2nmol SEQ IDNO.7和1.5×10^-2nmol SEQ ID NO.8；

五号反应管：含有针对gyrA的扩增引物混合组成，包含1.5×10^-2nmol SEQ ID NO.9和1.5×10^-2nmol SEQ ID NO.10；

六号反应管：含有针对PBP1的扩增引物混合组成，包含1.5×10^-2nmol SEQ ID NO.11和1.5×10^-2nmol SEQ ID NO.12；

七号反应管：含有针对cagA的扩增引物混合组成，包含1.5×10^-2nmol SEQ ID NO.13和1.5×10^-2nmol SEQ ID NO.14；

八号反应管：含有针对vacAs的扩增引物混合组成，包含1.5×10^-2nmol SEQ ID NO.15和1.5×10^-2nmol SEQ ID NO.16；

九号反应管：含有针对vacAm的扩增引物混合组成，包含1.5×10^-2nmol SEQ ID NO.17和1.5×10^-2nmol SEQ ID NO.18；

十号反应管：含有针对vacAi的扩增引物混合组成，包含1.5×10^-2nmol SEQ ID NO.19和1.5×10^-2nmol SEQ ID NO.20；

十一号反应管：含有针对vacAii的扩增引物混合组成，包含1.5×10^-2nmol SEQ IDNO.21和1.5×10^-2nmol SEQ ID NO.22。