[发明专利]一种脐带间充质干细胞原代培养方法在审
| 申请号： | 202010224533.3 | 申请日： | 2020-03-26 |
| 公开（公告）号： | CN111235102A | 公开（公告）日： | 2020-06-05 |
| 发明（设计）人： | 练春频;张万明;朱锋林 | 申请（专利权）人： | 苏州梅赛生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 215000 江苏省苏州市吴江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 脐带 间充质 干细胞 培养 方法 | ||
1.脐带间充质干细胞原代培养方法，其特征在于，所述脐带间充质干细胞原代培养方法使用Helios UltraGRO间充质干细胞培养补充剂，并且原代细胞培养所用的细胞培养皿预先用弹性蛋白原包被处理。
2.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞原代培养方法，其特征在于，所述脐带间充质干细胞原代培养方法中所述的Helios UltraGRO间充质干细胞培养补充剂的使用方法如下：所述脐带间充质干细胞原代培养方法中华通氏胶切成长条后放入Helios UltraGRO间充质干细胞培养补充剂中孵育4小时。
3.根据权利要求2所述的脐带间充质干细胞原代培养方法，其特征在于，所述使用的细胞培养皿预先用弹性蛋白原包被处理的方法如下：脐带间充质干细胞原代培养方法中细胞培养皿预先用20μg/mL弹性蛋白原包被处理，4℃放置过夜。
4.根据权利要求3所述的脐带间充质干细胞原代培养方法，其特征在于，所述脐带间充质干细胞原代培养方法中华通氏胶切成小块后接种于包被好的细胞培养皿中，采用组织贴壁法培养脐带间充质干细胞。
5.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞原代培养方法，其特征在于，所述脐带间充质干细胞原代培养方法包含如下步骤：
步骤(1)获取新生儿脐带，取组织保存液进行无菌和支原体检测后，用生理盐水清洗多次直至洗去脐带中残留的血液；
步骤(2)将步骤(1)获得的脐带找出并剔除脐带中的静脉血管和动脉血管，分离华通氏胶并用生理盐水充分洗涤华通氏胶；
步骤(3)将华通氏胶切成长条，把切好的华通氏胶长条放入Helios UltraGRO间充质干细胞培养补充剂中孵育4小时；
步骤(4)将步骤(3)中孵育过的华通氏胶长条用生理盐水洗3次，剪成小块(长宽均为2mm)；
步骤(5)细胞培养皿预先用20μg/mL弹性蛋白原包被处理，4℃放置过夜，将步骤(4)中的华通氏胶小块接种于包被好的细胞培养皿中，采用组织贴壁法培养脐带间充质干细胞；
步骤(6)组织培养获得原代脐带间充质干细胞。
6.根据权利要求5所述的脐带间充质干细胞原代培养方法，其特征在于，所述脐带间充质干细胞原代培养方法中使用的培养基为MEMα完全培养基，所述MEMα完全培养基制备方法为：MEMα基础培养基(体积百分比为95％)，Helios UltraGRO间充质干细胞培养补充剂(体积百分比为5％)，配置完成后再添加肝素使其浓度达到2IU/mL。
7.根据权利要求5所述的脐带间充质干细胞原代培养方法，其特征在于，所述的脐带间充质干细胞原代培养方法中原代细胞计数采用血球计数板计数法、原代细胞染色采用结晶紫染色液染色。
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