[发明专利]一种脐带间充质干细胞原代培养方法

说明书

本发明提供了一种全新的从脐带华通氏胶中分离获得大量脐带间充质干细胞的方法。本发明方法使用Helios UltraGRO间充质干细胞培养补充剂，原代细胞培养所用的细胞培养皿预先用20μg/mL弹性蛋白原(tropoelastin,TE)包被处理过。本发明方法能显著提高脐带间充质干细胞原代细胞产量的方法。本发明方法通过分离华通氏胶，经Helios UltraGRO间充质干细胞培养补充剂孵育后再贴壁培养于用弹性蛋白原包被处理过的细胞培养皿。与现有的分离方法相比，本发明所提供的改进方法能显著增加原代细胞的产量，在相同培养时间下能获得更多的原代细胞。

技术领域

本发明属于细胞生物学领域，特别涉及间充质干细胞培养。

背景技术

脐带间充质干细胞是可应用于再生医学领域和治疗系统性疾病的“实用型干细胞”。因其取材方便，无道德伦理争议，可获取的细胞数量多、活力强，便于扩增，没有配型和排异等问题而成为理想的种子细胞来源，适合于临床研究和应用。脐带间充质干细胞的研究虽然起步相对较晚，但进展迅速，是干细胞转化医学研究中最具发展前景的领域之一。利用脐带间充质干细胞的分化特性,预计在临床上可用于治疗各种涉及组织细胞变性、坏死、缺失引起的组织损伤退变类疾病等。

脐带间充质干细胞原代分离培养方法分为酶消化法和组织块贴壁培养法。酶消化法主要使用一种或多种酶对华通氏胶进行消化，其缺点主要包括：酶浓度、酶种类以及消化时间等均会影响最终的细胞纯度；同时操作步骤增加，过程繁琐，也会增加污染的机会。组织块贴壁培养法是通过分离华通氏胶后剪成小块再直接贴壁培养。相对于酶消化法，组织块贴壁培养法具有众多优点：操作简单，缩短样本处理时间；分离方法易于标准化；成本低；细胞纯度高等。但组织块贴壁培养法也存在细胞爬出的时间较长以及原代细胞产量少等缺点。因此，需要对脐带间充质干细胞的原代分离方法进行改进，才能获取到纯度高且数量多的细胞。

发明内容

为了解决上述现有方法的不足，本发明提供了一种全新的脐带间充质干细胞原代培养方法，该方法种能显著提高脐带间充质原代细胞产量。

Helios UltraGRO间充质干细胞培养补充剂和弹性蛋白原的新用途，该用途为Helios UltraGRO间充质干细胞培养补充剂和弹性蛋白原共同用于脐带间充质干细胞原代培养中，能显著增加原代细胞的产量，在相同培养时间下能获得更多的原代细胞。

根据本发明的一方面提供了脐带间充质干细胞原代培养方法，脐带间充质干细胞原代培养方法中使用的华通氏胶Helios UltraGRO间充质干细胞培养补充剂，并且使用的细胞培养皿预先用弹性蛋白原包被处理过。

根据本发明的一方面提供了一种脐带间充质干细胞原代培养方法，脐带间充质干细胞原代培养方法中使用的所述华通氏胶Helios UltraGRO间充质干细胞培养补充剂的方法如下：脐带间充质干细胞原代培养方法中华通氏胶放入Helios UltraGRO间充质干细胞培养补充剂中孵育4小时。

根据本发明的一方面提供了一种脐带间充质干细胞原代培养方法，使用的细胞培养皿预先用弹性蛋白原包被处理的方法如下：脐带间充质干细胞原代培养方法中细胞培养皿预先用20μg/mL弹性蛋白原包被处理，4℃放置过夜。

根据本发明的一方面提供了一种脐带间充质干细胞原代培养方法，脐带间充质干细胞原代培养方法中华通氏胶接种于包被好的细胞培养皿中，采用组织贴壁法培养脐带间充质干细胞。

根据本发明的一方面提供了一种脐带间充质干细胞原代培养方法，脐带间充质干细胞原代培养方法包含如下步骤：

步骤(1)获取新生儿脐带，取组织保存液进行无菌和支原体检测后，用生理盐水清洗多次直至洗去脐带中残留的血液；

步骤(2)将步骤(1)获得的脐带找出并剔除脐带中的静脉血管和动脉血管，分离华通氏胶并用生理盐水充分洗涤华通氏胶；