[发明专利]一种培养CD90posi细胞的培养基及其培养方法

说明书

本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种培养CD90posi细胞的培养基及其培养方法。本发明提供的CD90posi细胞的培养基，在基础培养基DMEM/F‑12中加入由PD‑1抑制剂与苦参碱按7：3重量比组成的细胞生长抑制剂，由松茸提取物和刺五加提取物按3：2重量比组成的突变抑制剂；采用三维培养的方法培养CD90posi细胞。采用本发明提供的培养基培养CD90posi细胞具有以下优点：细胞不易聚集成团，培养速度易于控制，同时，还能保证培养过程中细胞的活性，且不会出现在培养过程中细胞继续发生突变的问题。

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种培养CD90posi细胞的培养基及其培养方法。

背景技术

原发性肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发病率高、死亡率高，病死率位居国内肿瘤第二位，严重威胁人民群众的生命健康。肝癌起病隐匿，临床表现缺乏特别性，就医时往往处于肝癌中晚期，肝癌早期患者难以发现，严重影响肝癌的治疗效果。

目前肝癌的临床检测手段主要通过检测患者血清甲胎蛋白(AFP)并结合影像学检查进行确诊，可分为以下几类：B超检查受肠气及周围脏器的影响，分辨率低，B超引导下进行肝脏病灶穿刺活检存在一定假阴性率；同时肝脏穿刺存在创面出血、针道转移等严重并发症。CT或MR仅能分辨直径1.0cm以上的病灶，且有一定的假阳性率与假阴性率。DSA技术虽可提高肝癌检测的准确率，但为侵入性检查，多用于肝癌治疗。由于血清AFP显著升高一般出现在肿瘤进展期，且阳性率仅为60-70％，在准确率、检测效率、诊断扰动后对病人治疗风险性和诊断时间的滞后等方面都有明显的局限性，开发新的检测手段有其重要性与迫切性。

中国专利申请CN108872603A公开了一种用于肝癌干细胞的鉴定方法，这种方法虽然可以保证标志物蛋白的稳定表达，且表达量与LCSC细胞含量呈现出良好的线性关系，实现LCSC细胞含量的相对定量分析；然而，并没有解决现有肝癌细胞如何大量获取的过程，只有实现肝癌细胞的体外大量增殖，才能更好的对其进行分析。

综上所述，现有技术中，缺少培养肝癌细胞的有效方法，而采用现有培养基培养肝癌细胞具有容易聚集成团，不易控制，易发生突变等缺点。

在对肝细胞癌微环境细胞群的分析中，我们筛选出CD90posi肿瘤细胞，发现CD90posi细胞促进肝癌细胞的增殖、迁移。同时CD90posi细胞表现出很强的增殖潜力和细胞干性。将CD90posi肝癌细胞注射于裸鼠皮下，发现随着CD90posi细胞所占比例增加，移植的肿瘤体积和重量越大，表明CD90posi细胞是肝细胞癌增殖和生长的关键因素。

发明内容

针对现有技术普遍存在的缺点，本发明提供了一种培养CD90posi细胞的培养基及其培养方法。采用本发明提供的培养基培养CD90posi细胞不易聚集成团，培养速度易于控制，同时，还能保证培养过程中细胞的活性，且不会出现在培养过程中细胞继续发生突变的问题。

为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种培养CD90posi细胞的培养基，包含如下组分及其重量百分数：DMEM/F-12基础培养基94～97.5％，细胞生长抑制剂0.5～3％，突变抑制剂2～3％。

优选地，所述的培养CD90posi细胞的培养基，由如下组分及其重量百分数组成：DMEM/F-12基础培养基96％，细胞生长抑制剂1.5％，突变抑制剂2.5％。

优选地，所述细胞生长抑制剂由PD-1抑制剂与苦参碱按重量比6～8：2～4组成；所述突变抑制剂由松茸提取物和刺五加提取物按重量比2～4：1～3组成。

优选地，所述细胞生长抑制剂由PD-1抑制剂与苦参碱按重量比7：3组成；所述突变抑制剂由松茸提取物和刺五加提取物按重量比3：2组成。

本发明还提供了一种利用所述培养基培养CD90posi细胞的方法，包括如下步骤：