[发明专利]阿尔茨海默病大脑皮质类器官及其获得方法、应用

权利要求书

1.阿尔茨海默病大脑皮质类器官的获得方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1，通过慢病毒转染的方式，将APPSwe/Ind-PSEN1双突变基因转入小鼠iPSCs，得到含双突变基因的iPSCs；

S2，将含双突变基因的iPSCs传代培养，去除饲养层细胞，得到纯化的iPSCs；

S3，将纯化的iPSCs接种于细胞培养板a上在第一培养基中培养，每2天半量换液，培养4-6天后，将iPSCs形成的拟胚体转移到细胞培养板b上在第二培养基中培养，每两天换液一次，培养6-8天时，包被拟胚体周边伸出的半透明的神经上皮芽状突起，换用第三培养基低速摇动培养，每两天换液一次，持续培养60-65d后，收取标本，即得到阿尔茨海默病大脑皮质类器官；

所述第一培养基为：无LIF的iPSCs无血清培养基；

成分为：knockout DMEM；质量分数20％的KSR8；100×L-GlutaMax；100×NEAA；1000×2-ME，2-ME的浓度为10mM；

所述第二培养基为：神经上皮分化培养基；

成分为：DMEM-F12；100×N2 supplement；100×L-GlutaMax；100×NEAA；MouseNoggin；

所述第三培养基为：大脑皮质分化培养基，

成分为：DMEM/F12；Neurobasal medium；50×B27；100×N2 supplement；100×L-GlutaMax；100×NEAA；100×P/S；2μg/L Mouse IGF-I。

2.如权利要求1所述的阿尔茨海默病大脑皮质类器官的获得方法，其特征在于，S3中，纯化的iPSCs浓度为1×10⁴个/100μl。

3.如权利要求1所述的阿尔茨海默病大脑皮质类器官的获得方法，其特征在于，S3中，细胞培养板a为低黏附U型底96孔板，细胞培养板b为低黏附6孔板。

4.如权利要求1所述的阿尔茨海默病大脑皮质类器官的获得方法，其特征在于，S3中，第一培养基中添加有Rock抑制剂Y27362。

5.如权利要求4所述的阿尔茨海默病大脑皮质类器官的获得方法，其特征在于，所述Rock抑制剂Y27362的终浓度为50μM。

6.如权利要求1所述的阿尔茨海默病大脑皮质类器官的获得方法，其特征在于，S3中，利用Matrigel基质胶包被拟胚体周边伸出的半透明的神经上皮芽状突起。

7.如权利要求1所述的阿尔茨海默病大脑皮质类器官的获得方法，其特征在于，S3中，培养条件均为37℃、体积分数5％的CO₂、平衡湿度。

8.利用权利要求1-7任一项所述的方法获得的阿尔茨海默病大脑皮质类器官。

9.如权利要求8所述的阿尔茨海默病大脑皮质类器官作为阿尔茨海默病模型的应用。

10.如权利要求8所述的阿尔茨海默病大脑皮质类器官作为阿尔茨海默病治疗药物筛选平台的应用。