[发明专利]含糖链目标物质的检测方法和试剂、检测用载体及其制造方法

说明书

本发明涉及对于含特定的糖链的糖蛋白质等的检测有用的目标物质的检测方法、目标物质的检测用试剂、载体及所述载体的制造方法。

本申请是2015年1月30日提交的发明名称为“含糖链目标物质的检测用试剂、检测方法、及为检测含糖链目标物质使用的载体以及其制造方法”的发明专利申请201580010658.3的分案申请。

【技术领域】

本发明涉及目标物质的检测用试剂。更具体而言，本发明涉及对于含特定的糖链的糖蛋白质等的检测有用的目标物质的检测方法、目标物质的检测用试剂、载体及所述载体的制造方法。

【背景技术】

一般而言，糖链是由糖苷键共价键合的多个单糖构成的化合物。所述糖链，例如，与蛋白质或脂质结合而形成糖蛋白质或糖脂质。

作为分析含糖链目标物质等的方法，提议例如，使用与糖链结合的凝集素分析所述糖链或目标物质的方法(参照例如，专利文献1及2)。

专利文献1中记载的方法是利用显示与糖链相互作用的蛋白质和糖链或复合糖质上的糖链的相互作用解析糖链结构的方法。在专利文献1中记载的方法中，使用作为显示与所述糖链相互作用的蛋白质的凝集素经具有环氧基作为活性基的化合物而固定化到基板的阵列。

另外，专利文献2中记载的方法是使用作为与作为糖蛋白质的Mac-2结合蛋白质(Mac-2-binding protein；以下也称为“M2BP”)的糖链结合的凝集素的多花紫藤(Wisteriafloribunda)的凝集素(Wisteria floribunda Agglutinin)(以下也称为“WFA”)等测定M2BP的方法。在专利文献2中记载的方法中，作为所述凝集素，使用生物素结合到所述凝集素的生物素化凝集素经链霉亲和素固定化的磁性粒子、固定化了所述凝集素的阵列等。

在这些专利文献1及2中记载的方法中，为了使凝集素的活性充分地表达而检测糖链，在保持天然的凝集素的亚基结构的状态下将所述凝集素固定化到固相。

【现有技术文献】

【专利文献】

专利文献1：美国专利申请公开第2007/202535号说明书

专利文献2：美国专利申请公开第2012/172247号说明书

【发明概述】

【发明要解决的技术课题】

但是，凝集素在与糖链的反应时，有必要维持立体结构，但在溶液中经长期间稳定地维持立体结构是困难的，从而难以确保充分的反应性。

本发明鉴于所述以往技术实情而进行，旨在提供有对目标物质的高的反应性，而且对于保存稳定性优良的目标物质的检测用试剂、为检测目标物质使用的载体及所述载体的制造方法以及能确保高的灵敏度及高的再现性的目标物质的检测方法。

【解决课题的技术方案】

本发明之一侧面是用于检测含与WFA结合的糖链的目标物质的试剂，其包括以含有WFA经二聚体化的二聚体WFA被固定化到固相载体上的二聚体WFA固定化载体作为特征的目标物质的检测用试剂。

本实施方式涉及的目标物质的检测用试剂由于含有二聚体WFA固定化载体，从而维持向糖链、特别是，在末端有N-乙酰-D-半乳糖胺〔IUPAC名：2-(乙酰氨基)-2-脱氧-D-半乳糖〕残基(以下也称为“GalNAc残基”)的糖链的结合能，且有比含有天然存在的WFA(4聚体WFA)固定化到固相载体上的载体的试剂高的对所述糖链的反应性，而且保存稳定性优良。从而，通过在含糖链目标物质的检测中使用本实施方式涉及的目标物质的检测用试剂，能得到高的灵敏度及高的再现性。

在本实施方式涉及的目标物质的检测用试剂中，优选二聚体WFA经生物素和生物素结合蛋白质而固定化到固相载体。