[发明专利]抗人转化生长因子β1的纳米抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了抗人转化生长因子β1的纳米抗体及其制备方法和应用，属于生物制药领域。提供的制备方法采用噬菌体展示技术和生物淘筛技术获得与抗原具有较高结合力的抗人转化生长因子β1的纳米抗体。该纳米抗体能够特异性地和天然TGF‑β1蛋白的三种形式：LAP前体、TGF‑β1单体及二聚体进行结合，并且具有特异性强和亲和力高的特点，能够有效中和肿瘤微环境中自分泌或旁分泌TGF‑β1，为肿瘤的免疫治疗、治疗伤口愈合，促进组织修复和胚胎发育等方面提供一种基因工具。

技术领域

本发明属于生物制药领域，涉及抗人转化生长因子β1的纳米抗体及其制备方法应用，具体涉及6种对人转化生长因子β1具有高特异性识别和高亲和力的抗人转化生长因子β1的纳米抗体及其制备方法和应用。

背景技术

转化生长因子β(TGF-β)是调节细胞生长、分化和免疫功能的细胞因子之一。目前人类TGF-β超家族有TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、TGF-β1β2四个成员，其中TGF-β1兼具调节细胞增殖分化、控制细胞外基质蛋白的合成与降解等功能，其还可参与胚胎与骨骼的发生、组织重塑和伤口愈合等过程。然而，在肿瘤恶性进展期间，几乎所有肿瘤细胞内可监测到TGF-β1的高度活化表达，其作用由抑癌转为促癌。临床上，肿瘤患者血清中TGF-β1的水平与肿瘤恶性程度及预后也密切相关。TGF-β1与其受体结合后，能通过加速血管生成和上皮-间充质转化、增强基质修饰等方式促进肿瘤的生长及侵袭转移；TGF-β1信号通路还可阻止T细胞分化成细胞毒性T淋巴细胞、降低树突状细胞的抗原呈递能力、抑制IFN-γ和TNF-α的产生等。由此可见，TGF-β1能抑制抗肿瘤免疫应答，在肿瘤免疫逃逸过程中扮演着重要角色，故通过中和抗体封闭TGF-β1是肿瘤免疫治疗的关键点之一。

已有研究表明，靶向TGF-β1信号通路的封闭抗体，如抗TGF-β1抗体Fresolimumab(GC1008)、抗TGF-β1受体抗体Lapatimab(AB0213)等，可以显著减少肿瘤基质蛋白的合成和成纤维细胞的数量，进而抑制肿瘤的生长和迁移；然而现有大部分完整抗体存在免疫原性高、溶解性差、易沾粘聚集和易被蛋白酶降解等缺点，限制了这类蛋白抗体在封闭TGF-β1进而抑制肿瘤生长和迁移中的应用。

发明内容

针对现有技术中存在的问题的一个或多个，本发明一个方面提供了对人转化生长因子β1具有高特异性和高亲和力的抗人转化生长因子β1的纳米抗体，所述纳米抗体的氨基酸序列包含以下a)-f)中的任一项：

a)序列表中SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；

b)序列表中SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列；

c)序列表中SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列；

d)序列表中SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列；

e)序列表中SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列；

f)序列表中SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。

本发明另一方面提供了编码上述的纳米抗体的氨基酸序列的核苷酸编码序列。

上述核苷酸编码序列包含以下a’)-g’)中的任一项：

a’)序列表中SEQ ID NO:11所示的核苷酸序列；

b’)序列表中SEQ ID NO:13所示的核苷酸序列；

c’)序列表中SEQ ID NO:15所示的核苷酸序列；

d’)序列表中SEQ ID NO:17所示的核苷酸序列；

e’)序列表中SEQ ID NO:19所示的核苷酸序列；

f’)序列表中SEQ ID NO:21所示的核苷酸序列；