[发明专利]用于检测SARS-CoV-2冠状病毒的试剂盒及其专用引物和探针

说明书

本发明公开一种用于检测SARS‑CoV‑2冠状病毒的试剂盒及其专用引物和探针，属于生物技术领域。提供的试剂盒及其专用引物和探针可用于快速检测SARS‑COV‑2冠状病毒，实现待测样品的快速定性和定量检测，可以在SARS‑COV‑2冠状病毒的检测以及疫苗生产过程中发挥重要作用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于检测SARS-CoV-2冠状病毒的试剂盒及其 专用引物和探针。

背景技术

研究表明SARS-COV-2与2003年“非典”SARS冠状病毒(SARS-CoV)和“中东呼吸综合征”MERS冠状病毒(MERS-CoV)一样，同属于β属冠状病毒。通过基因序列比对， SARS-COV-2与SARS-CoV有约80％相似性，与MERS-CoV有40％的相似性。

SARS-COV-2冠状病毒目前在全球多个国家的感染人群已经超过了数十万人，并且还处 于爆发的趋势，虽然各个国家都在积极控制，但由于其传染性强，对人类健康仍然是一个重 大的潜在威胁，因此建立一种快速、准确、特异性检测该病毒的方法和工具，对疫情的传播 控制具有重大意义。

发明内容

针对现有技术中存在的问题的一个或多个，本发明一个方面提供一种用于对SARS-COV-2冠状病毒进行实时荧光定量PCR检测的引物和探针，其中所述引物包括上游引物SA-F1和下游引物SA-R1，其中所述SA-F1的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述SA-R1的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

上述探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。

上述荧光报告基团为选自FAM、ROX、CY5、HEX中的任一种，所述荧光淬灭基团为 选自TAMRA、BHQ、Eclipse中的任一种。

本发明另一方面提供一种用于对SARS-COV-2冠状病毒进行实时荧光定量PCR检测的 试剂盒，其包括上述的引物和探针；使用该试剂盒时的20μL实时荧光定量PCR检测体系中 所述引物和探针的用量为：每条引物的最终使用浓度各为0.1～1.0μM，探针的最终使用浓度 为0.1～0.5μM。

上述试剂盒中还包括阳性对照品和阴性对照品，阳性对照品为SARS-COV-2冠状病毒阳 性质控品，阴性对照品为不含SARS-COV-2冠状病毒的反应体系。

上述的试剂盒在对SARS-COV-2冠状病毒进行非疾病诊断目的的检测中的应用也属于本 发明的内容。

上述的应用为一种用实时荧光定量PCR技术对SARS-COV-2冠状病毒进行非疾病诊断 目的的定性和定量检测方法，包括以下步骤：

1)建立标准曲线：将SARS-COV-2冠状病毒阳性质控品按照10倍梯度稀释至1×10⁷copies/μL、1×10⁶copies/μL、1×10⁵copies/μL、1×10⁴copies/μL、1×10³copies/μL、1×10²copies/μL、 1×10¹copies/μL作为标准品；以不同浓度的标准品作为模板，在上述的引物和探针的引导下进 行实时荧光定量PCR检测，检测结束后，以各标准品的浓度Log值(X轴)对其相应Ct值 (Y轴)作图，绘制标准曲线；

2)提取待测样品的基因组RNA，以提取的基因组RNA为模板，在上述的引物和探针的 引导下进行实时荧光定量PCR检测，同步进行检测阳性对照品和阴性对照品；

3)用得到的Ct值和荧光信号的变化实现对SARS-COV-2冠状病毒的定性检测，再根据 Ct值和步骤1)中的标准曲线，得出待测样品中所含SARS-COV-2冠状病毒的拷贝数，实现定量检测。