[发明专利]PBMC体外3D琼脂糖水凝胶培养基及其制备方法

权利要求书

1.一种PBMC体外3D琼脂糖水凝胶培养基，其特征在于，所述培养基含有以下组分：1640培养基、胎牛血清、琼脂糖；各组分含量如下：1640培养基溶液10mg/mL，胎牛血清10-20v/v％，琼脂糖0.3-0.5wt％。

2.一种权利要求1所述PBMC体外3D琼脂糖水凝胶培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、配制4％琼脂糖溶液：称取0.4g琼脂糖溶液，准备100mL试剂瓶加入10mL三蒸水，将称取完成的琼脂糖溶液缓慢撒入三蒸水溶液内，进行溶解；采用高温高压灭菌锅灭菌，灭菌结束后，取出放入50℃水浴箱60min，冷却至50℃，待用；

步骤二、配制1％琼脂糖溶液：取步骤一配制的10mL 4％琼脂糖溶液，依次加入4X1640培养基(40mg/mL)10mL，三蒸水14-17mL，胎牛血清3-6mL；最终配制成40mL总体积；

步骤三、所需细胞液体量计算：按琼脂糖最终浓度为H计算，(1)确定最终需要的细胞培养体积，假设为X mL；确定需要的最终细胞培养浓度，假设E万细胞/mL；如果待培养细胞液浓度为F万/mL，则需要细胞液体Y mL＝E X/F；(2)所需1％琼脂糖液体量Z计算：Z mL＝H*X；(3)所需1640培养液：M mL＝X-Y-Z；

步骤四、配制3D培养基：根据步骤四的计算结果，将Y mL的细胞液、Z mL的1％琼脂糖溶液及M mL的1640培养液充分混合后备用。

3.根据权利要求2所述PBMC体外3D琼脂糖水凝胶培养基的制备方法，其特征在于，步骤一中溶解操作具体为微波炉低火2min。