[发明专利]基于通用探针芯片的多重定量PCR检测系统

权利要求书

1.一种基于表面探针的定量PCR检测体系，其特征在于，所述检测体系包括：

(a)一固相载体，所述固相载体的一个主表面设有n个子检测区，其中，n为≥2的正整数，并且至少一个子检测区为表面定量子检测区；

其中，所述的各表面定量子检测区各自独立地固定有微阵列表面探针，所述微阵列表面探针为单链核酸，并且所述微阵列表面探针的一端固定于所述的固相载体的表面，并且所述微阵列表面探针带有第一可检测标记物，所述的第一可检测标记物选自下组：荧光基团、发光基团、发光标记物、量子点、或其组合；

(b) 待检测序列特异性引物对，包括第一引物和第二引物；

(c) 淬灭探针，所述淬灭探针的一侧或中间连接有淬灭基团；

并且，所述淬灭探针与至少一个表面定量子检测区的微阵列表面探针可结合从而形成双链结构，并且在所述双链结构中，所述的淬灭探针的淬灭基团使得所述的微阵列表面探针的第一可检测标记物的信号被全部或部分淬灭；当检测体系中的所述淬灭探针的浓度降低时，至少一个表面定量子检测区的微阵列表面探针的第一可检测标记物的信号的淬灭程度降低；

所述第一引物具有式I结构：

5’-T_ai’-L_ai-C_a-L_{b i}-P_i-L_{c i}-T_bi-T_ai-3’（I）

其中，i是n’重检测中的第i重，i为正整数且1 ≤i ≤n’；n’为正整数且1 ≤n’≤固相载体子检测区数目；

T_ai为第i重靶向基因的正向特异性序列的a部分；

T_ai’为T_ai的反向互补序列；

T_bi为第i重靶向基因的正向特异性序列的b部分；并且T_ai，T_bi直接相邻连接，共同组成靶向基因的正向特异性序列；

P_i为标记第i重基因扩增的标记探针序列；

C_a为正向通用型扩增引物序列；

L_ai、L_bi、L_ci各自独立地为无或柔性过渡区，所述柔性过渡区选自下组：长度为1-15nt的柔性过渡核酸片段、长度为1-10nt的柔性过渡聚合物片段、或其组合；

各“-”独立地为键或核苷酸连接序列；

所述第二引物具有式II结构：

5’-C_b-L_di-T_revi’-3’（II）

其中，

C_b为反向通用扩增引物序列；

L_di为无或柔性过渡区，所述柔性过渡区为长度为1-10nt的柔性过渡核酸片段；

T_revi’为第i重靶向基因3’端特异性序列；

所述淬灭探针具有式III结构：

5’-Q-P_i-3’（III）

其中，Q为淬灭基团；

P_i为标记第i重基因扩增的标记探针序列。