[发明专利]一种G3BP1重组慢病毒载体及其应用

权利要求书

1.一种重组慢病毒载体，其特征在于，所述重组慢病毒载体包括插入有外源G3BP1基因的慢病毒载体；

所述慢病毒载体包括pLenti-CMV-GFP-EF1a-Puro。

2.根据权利要求1所述的重组慢病毒载体，其特征在于，所述G3BP1基因包括如SEQ IDNO:1所示的核酸序列；

优选地，所述pLenti-CMV-GFP-EF1a-Puro包括如SEQ ID NO:2所示的核酸序列；

优选地，重组慢病毒载体包括如SEQ ID NO:3所示的核酸序列。

3.一种重组慢病毒，其特征在于，所述重组慢病毒采用权利要求1或2所述的重组慢病毒载体与辅助质粒共转染哺乳细胞制备得到；

优选地，所述哺乳细胞包括293细胞、293T细胞或293F细胞中的任意一种或至少两种的组合。

4.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞包括含有权利要求1或2所述的重组慢病毒载体和/或权利要求3所述的重组慢病毒的宿主细胞；

优选地，所述宿主细胞包括Hela细胞。

5.一种权利要求4所述的重组细胞的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)构建权利要求1或2所述的重组慢病毒载体；

(2)将步骤(1)所述的重组慢病毒载体与辅助质粒共转染哺乳细胞，构建重组慢病毒；

(3)将步骤(2)所述的重组慢病毒转化入宿主细胞基因组，得到所述重组细胞。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述重组慢病毒载体的构建方法为将PCR扩增得到的G3BP1基因插入pLenti-CMV-GFP-EF1a-Puro中，得到所述重组慢病毒载体；

优选地，所述PCR扩增的引物包括如SEQ ID NO:4～5所示的核酸序列；

优选地，所述G3BP1基因插入pLenti-CMV-GFP-EF1a-Puro的XbaI和NotI酶切位点之间；

优选地，步骤(2)所述辅助质粒包括psPAX2和pMD2G；

优选地，步骤(2)所述哺乳细胞包括293细胞、293T细胞或293F细胞中的任意一种或至少两种的组合；

优选地，步骤(3)所述宿主细胞包括Hela细胞。

7.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的重组慢病毒载体、权利要求3所述的重组慢病毒或权利要求4所述的重组细胞中的任意一种或至少两种的组合；

优选地，所述试剂盒还包括免疫荧光检测试剂。

8.一种权利要求1或2所述的重组慢病毒载体、权利要求3所述的重组慢病毒或权利要求4所述的重组细胞或权利要求7所述的试剂盒在监测应激颗粒形成过程中的应用。

9.一种监测应激颗粒形成过程的方法，其特征在于，所述方法包括：

采用亚砷酸钠、热休克处理权利要求4所述的重组细胞，或采用病毒感染权利要求4所述的重组细胞，通过细胞成像多功能检测仪和/或激光共聚焦显微镜监测重组细胞内应激颗粒的形成过程。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述亚砷酸钠的粒径为100～1000μm；

优选地，所述热休克处理的温度为40～60℃；

优选地，所述病毒包括新城疫病毒；

优选地，所述病毒的感染复数为0.5～2MOI。