[发明专利]一种DNA标签序列的构建方法及其应用

权利要求书

1.一种DNA标签序列，其特征在于：所述DNA标签序列为一套长度为8bp的DNA标签序列，所述DNA标签序列建立基于PCR的DNA标签文库构建方法；且所述DNA标签序列包括表1所示的115个DNA标签序列。

2.一种如权利要求1所述的DNA标签序列应用在DNA标签文库的构建方法，其特征在于:所述方法包括将DNA标签序列通过嵌入引物下游构建单端标签，或将DNA标签序列通过嵌入引物的上游以及引物的下游构建双端标签文库。

3.根据权利要求2所述的DNA标签序列应用在DNA标签文库的构建方法，其特征在于：所述引物包括正向扩增引物以及反向扩增引物，且在Illumina测序平台采用所述正向扩增引物序列为AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCATACCGTCACGAGGTTGTTCG或AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC[i5barcode]ACACTCTTTCATACCGTCACGAGGTTGTTCG，所述反向扩增引物序列为：CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT(i7barcode)GTGACTGGACAAGTTGCCAGCACGCAATT。

4.根据权利要求2所述的DNA标签序列应用在DNA标签文库的构建方法，其特征在于：所述引物包括正向扩增引物以及反向扩增引物，在Ion Torrent测序平台采用的所述正向扩增引物序列为：CCTCTCTATGGGCAGTCGGTGATCAAGTTGCCAGCACGCAATT；所述反向扩增引物序列为：CCATCTCATCCCTGCGTGTCTCCGACTCAG[barcode]GATATACCGTCACGAGGTTGTTCG。

5.根据权利要求2所述的DNA标签序列应用在DNA标签文库的构建方法，其特征在于：所述方法包括将DNA标签序列通过嵌入引物下游形成包含DNA标签的PCR引物构建单端标签，或将DNA标签序列通过嵌入引物的上游以及引物的下游形成包含DNA标签的PCR引物构建双端标签文库，获得表2以及表3所示的不同平台的标签引物序列。

6.根据权利要求2所述的DNA标签序列应用在DNA标签文库的构建方法，其特征在于：所述构建方法包括将通用接头序列连接到目标序列上以及通过包含标签序列的PCR引物将标签序列连接到目标序列上。

7.根据权利要求2所述的DNA标签序列应用在DNA标签文库的构建方法，其特征在于：所述构建方法包括以下步骤：

A.准备N个待检测核酸样本；

B.将各待测核酸样本与PCR premix、Primer mix、ddH₂O混合，得到第一预混PCR反应液；

C.将预混PCR反应液放置于常规PCR仪进行第一轮PCR扩增；

D.对第一轮PCR扩增产物进行分选、纯化；

E.将纯化后的第一轮PCR扩增产物与PCR premix、含标签序列接头引物P1、ddH₂O混合，得到第二预混PCR反应液；

F.将第二预混PCR反应液放置于常规PCR仪进行第二轮PCR扩增，得到第二轮PCR扩增产物；

G.将第二轮PCR扩增产物进行分选、纯化，得到带标签序列的目标区域核酸片段。