[发明专利]一种DNA标签序列的构建方法及其应用

说明书

本发明公开了一种DNA标签序列的构建方法及其应用，DNA标签序列建立基于PCR的DNA标签文库构建方法；且DNA标签序列包括115个DNA标签序列或相差一个碱基的DNA标签序列中的若干个；本发明通过构建长度为8bp标签序列，通过嵌入引物下游形成包含DNA标签的PCR引物构建单端标签，或将DNA标签序列通过嵌入引物的上游以及引物的下游形成包含DNA标签的PCR引物构建双端标签文库，利用PCR扩增达到标签序列和测序接头同时连接的效果，并且根据不同的测序平台采用不同的引物序列，建立基于2轮PCR即可完成建库的方法，具有高通量、操作简单、成本低等优点。能实现11个样本的并行测序，具有广泛的应用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域中的DNA标签文库的构建方法，特别涉及一种DNA标签序列的构建方法及其应用。

背景技术

Sanger测序法发展出自动化、平行测序，并最终于2001年完成第一个人全基因组草图。但Sanger测序法具有一定的局限性，它依赖于电泳分离技术，无法进一步扩大和通量化，因此无法进行基因组序列测定的规模化，另外该测序方法的费用十分昂贵。随着测序技术快速发展，涌现出多种新型测序技术，罗氏(Roche)454公司的Genome Sequencer(GS)、Illumina公司的Solexa和ABI公司的SOLID构成了二代测序的主要平台；这些测序技术具有三个共同点：1、不同与需要细菌克隆的DNA片段化，二代测序技术基于无细胞系统下的文库准备；2、相对于小规模几百个反应，二代测序技术平行运行成千上百万个反应；3、二代测序结果可以直接读取而不需要电泳。基于以上特点，第二代测序技术大大降低了测序成本的同时，还大幅提高了测序速度，并且保持了高准确性；完成第一个人全基因组草图耗时十多年，耗费30亿美元，而使用illumina Novaseq 6000使得100美元一个人基因组成为可能。此外，目前也已经发展出以单分子测序为特点的第三代测序技术，如Pacific Biosciences公司的SMRT技术和OxfordNanopore Technologies公司的纳米孔单分子技术。

随着人类基因组计划的完成以及测序技术的快速发展，测序技术已经越来越广泛应用于医学、健康领域，目前已应用于新生儿筛查、肿瘤个体化医疗、肿瘤早筛、感染精准治疗、遗传病、消费基因检测等方面。高通量测序技术已成为临床研究及应用领域的重要技术手段。而且整个测序过程中，基因文库的构建是至关重要的，但是，现有技术中，仍然需要提供一种DNA标签集合的构建方法并将DNA标签集合进行应用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种DNA标签集合的构建方法及其应用。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案为：

一种DNA标签序列，所述DNA标签序列为一套长度为8bp的DNA标签序列，所述DNA标签序列建立基于PCR的DNA标签文库构建方法；且所述DNA标签序列包括表1所示的115个DNA标签序列或相差一个碱基的DNA标签序列中的若干个。

优选地，所述DNA标签序列为DNA Barcode1～DNA Barcode10、DNA Barcode11～DNA Barcode20、DNA Barcode21～DNA Barcode30、DNA Barcode31～DNA Barcode40、DNABarcode41～DNA Barcode50、DNA Barcode51～DNA Barcode60、DNA Barcode61～DNABarcode70、DNA Barcode71～DNA Barcode80、DNA Barcode81～DNA Barcode90、DNABarcode91～DNA Barcode100、DNA Barcode101～DNA Barcode110以及DNA Barcode111～DNABarcode115中的一种或多种的组合。

优选地，所述的相差1个碱基，包括DNA标签序列任意位置上的1个碱基的替换、插入和删除。