[发明专利]一种孕妇外周血胎儿有核红细胞分离纯化方法及分离仪在审
| 申请号： | 202010235362.4 | 申请日： | 2020-03-30 |
| 公开（公告）号： | CN111235104A | 公开（公告）日： | 2020-06-05 |
| 发明（设计）人： | 韩波;李胜;冯鑫鑫;张丽;李浩;黄劭毅;姜殿东;王静;吕建利 | 申请（专利权）人： | 山东省立医院;山东省药物研究院 |
| 主分类号： | C12N5/078 | 分类号： | C12N5/078 |
| 代理公司： | 济南泉城专利商标事务所 37218 | 代理人： | 李桂存 |
| 地址： | 250021 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 孕妇 外周血 胎儿 红细胞 分离 纯化 方法 | ||
1.一种孕妇外周血胎儿有核红细胞分离方法，其特征在于：具体操作步骤如下
（1）CD71阳性细胞系K562细胞的培养及抗体检测；
（2）建立捕获体系：微球的制作和抗体的偶联；利用K562细胞获得最佳捕获条件；利用脐带血优化最佳捕获条件；
（3）分离收集胎儿有核红细胞。
2.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于：所述的步骤（1）CD71阳性细胞系K562细胞的培养及抗体的检测；具体包括以下步骤：培养CD71阳性的细胞系K562；选择CD71多克隆抗体、单克隆抗体进行免疫荧光实验，验证抗体的结合力。
3.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于：所述的步骤（2）建立捕获体系，包括以下步骤：
S1微球分别与步骤（1）多克隆抗体偶联；
S2获得最佳捕获条件：将S1中偶联多克隆抗体的微球加入至含步骤（1）细胞的未孕妇女外周血中，孵育，利用CTCBIOPSY®检测系统进行分离，观察细胞的捕获情况；
S3临床收集脐带血，将S2最佳捕获条件的微球加入到脐带血中，孵育，利用CTCBIOPSY®检测系统进行分离，观察细胞的捕获情况；
S4确定捕获细胞的胎儿源性：将捕获到的细胞分别进行CD147、CD45、DAPI免疫荧光染色确定细胞的胎儿源性。
4.根据权利要求3所述的分离方法，其特征在于，所述的步骤S1的微球为：1μm四氧化三铁微球或300nm PS微球中的一种；微球中CD71抗体的浓度为：15-20μg/ml。
5.根据权利要求3所述的分离方法，其特征在于，所述的步骤S2中，孵育的条件为：室温旋转混悬仪20r/min，孵育30min。
6.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于：所述的步骤（3）分离收集胎儿有核红细胞，包括以下步骤：
J1采集外周血：采集孕11-28周孕妇的外周血，加入红细胞裂解液离心后收集细胞沉淀物；
J2 细胞沉淀物重悬后加入步骤（2）得到的捕获体系，利用CTCBIOPSY®检测系统进行分离，收集分选出胎儿有核红细胞。
7.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述的步骤（3）还包括：细胞的胎儿源性的鉴定，具体方法为：利用免疫荧光及Y染色体特异序列鉴定。
8.一种采用权利要求1所述方法制备的分离仪。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于山东省立医院;山东省药物研究院，未经山东省立医院;山东省药物研究院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202010235362.4/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：一种磨豆咖啡壶的流水装置
- 下一篇：一种矿井水中卤代烃处理行架设备及方法
