[发明专利]一种鳜鱼蛙病毒及弹状病毒双重PCR检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及一种鳜鱼蛙病毒及弹状病毒双重PCR检测试剂盒及检测方法，属于PCR技术领域。本发明提供的鳜鱼蛙病毒及弹状病毒双重PCR检测试剂盒，包括引物、EasyTaq PCR SuperMix、阴性对照液和阳性对照液；其中，所述引物包括针鳜鱼蛙病毒的MCP基因保守区设计的的引物，还包括针对鳜鱼弹状病毒的N基因保守区设计的引物。本发明所述的鳜鱼蛙病毒及弹状病毒双重PCR检测试剂盒及检测方法，可以同时快速、高效、准确的检测鳜鱼蛙病毒和弹状病毒，省时省力，为染病的鳜鱼争取更多的治疗时间，对于后续研究及防控具有重要意义。

技术领域

本发明涉及一种鳜鱼蛙病毒及弹状病毒双重PCR检测试剂盒及检测方法，属于PCR技术领域。

背景技术

鳜鱼为近年来水产养殖户们青睐的品种，其肉质鲜美，营养价值高，格外受群众欢迎。然而，鳜鱼蛙病毒(Siniperca chuatsi ranairidovirus，SCRIV)和鳜鱼弹状病毒(Siniperca chuatsi rhabdovirus,SCRV)是近年来引起鳜鱼发病的主要病毒性病原，是对鳜鱼养殖业危害极大的两种病毒，一旦感染发病，鳜鱼存活率极低，且没有有效的治疗方法，给养殖户们带来极大的经济损失。

当前，在实验室检测SCRIV和SCRV病毒最常见的方法为聚合酶链式反应检测法。聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)又被称为无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。聚合酶链式反应像是一种生物体外的特殊DNA复制，其最大的特点是能将微量的DNA大幅增加，使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高等特点。近年来的流行病学研究中发现存在SCRIV和SCRV混合的感染的现象，目前，实验室检测主要为分别进行SCRIV和SCRV PCR检测，需要进行两次PCR对不同的病毒进行检测，该方法费时费力。

鳜鱼虹彩病毒和鳜鱼弹状病毒等病毒性疾病的高发，限制着鳜鱼养殖产业的发展，这两种病毒引起的疾病一旦发病一般没有有效的治疗方法，致死率高，而且鳜鱼更是常发生多种病毒混合感染的情况，给养殖中疾病的防控加大了难度，因此快速有效地诊断病原尤为关键，且尽早检出这两种病毒具有重要的现实意义。

发明内容

目前，鳜鱼蛙病毒(SCRIV)及弹状病毒(SCRV)的防治方面没有特效药物，因此SCRIV和SCRV的早期监测和诊断显得尤为重要，然而常规的PCR检测方法单次只能检测一个病毒，需要大量的时间，操作也相当复杂，拖延了检测进度，进而错过最佳治疗时间。

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供同时快速、准确、高效的检测鳜鱼蛙病毒(SCRIV)及弹状病毒(SCRV)双重PCR检测试剂盒及检测方法。

本发明所述的鳜鱼蛙病毒(SCRIV)及弹状病毒(SCRV)双重PCR检测试剂盒及检测方法一旦建立成功，一次PCR的时间下能检测两种病毒，省时省力，争取更多的治疗时间，对于后续研究及防控具有重要意义。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种鳜鱼蛙病毒及弹状病毒双重PCR检测试剂盒，包括引物、EasyTaq PCR SuperMix、阴性对照液和阳性对照液；其中，所述引物包括针鳜鱼蛙病毒的MCP基因保守区设计的的引物，还包括针对鳜鱼弹状病毒的N基因保守区设计的引物。

作为本发明所述试剂盒的一种优选实施方式，所述针鳜鱼蛙病毒的MCP基因保守区设计的的引物为SCRIV-400-F/SCRIV-400-R；所述针对鳜鱼弹状病毒的N基因保守区设计的引物分别为SCRV-280-F/SCRV-280-R；其中，所述引物序列如下所示：

SCRIV-400-F：AGTACACCATGCCAGAGGCCAAGC；SEQ ID NO：1；

SCRIV-400-R：CCATGTCCCTGACTGAGCTGCTC；SEQ ID NO：2；