[发明专利]PRL、PIGF及NGFR表达量的检测方法及应用

权利要求书

1.一种PRL、PIGF及NGFR表达量的检测方法，其特征是包括如下步骤：

一、采集血清样本；

二、按照样本量设置零孔，TMB显色孔，标准品孔及样本孔，并标识；

三、用移液枪分别在标准品孔及样本孔中加入标准品及血清100ul，注意不要碰触到孔壁和孔底,盖上板贴，至37℃恒温箱中孵育2h；

四、标准品孔及样本孔中每孔加入生物素标记抗体工作液100 ul，注意不要碰触到孔壁和孔底，盖上新板贴，放置于37℃恒温箱中，静置1 h；

五、将板内液体甩干，孔内未见明显附壁水滴，洗板3次，每孔加入洗液工作液200ul，浸泡2min；

洗板后在滤纸上拍干，可见孔壁和孔底未见明显附壁水滴；

六、用移液枪分别在先前设置的标准品孔及样本孔中加液，每孔加入过氧化物酶标记亲和素工作液100 ul，注意不要碰触到孔壁和孔底；

盖上新板贴，置于恒温箱中，温度恒定37℃，静置1 h；

七、将板内液体甩干，孔内未见明显附壁水滴，洗板5次，每孔加入洗液工作液200ul，浸泡2min；

洗板后在滤纸上拍干，可见孔壁和孔底未见明显附壁水滴；

八、除空白孔外，用移液枪在其余每孔中加入TMB显色液90ul，注意不要碰触到孔壁和孔底，在37℃恒温箱中避光显色25min；

九、看到标准品孔中有明显颜色反应后；

除空白孔外，在其余每孔中加入终止液50ul；

十、加入终止液后可见孔内液体转为黄色，观察到反应后5min内，用酶标仪测量板内各孔OD值，设定测量波长为450nm；

十一、计算出三种蛋白浓度。

2.一种PRL、PIGF及NGFR表达量作为肿瘤标志物的应用。