[发明专利]一种靶向NEDD4基因的siRNA核酸脂质体及其用途

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种靶向NEDD4基因的siRNA核酸脂质体及其用途。本发明由阳离子脂质体组分与siRNA结合得到的siRNA核酸脂质体膜与细胞膜相似，表面带正电性，不易被核酸酶降解，能够使负载的siRNA进入细胞靶向性沉默NEDD4基因，达到治疗大肠癌的目的。本发明进一步验证偏中性的透明质酸HA添加后的siRNA‑HA脂质体加强siRNA脂质体靶向性的同时优化了其稳定性，且透明质酸作为CD44受体细胞可以靶向大肠癌中的CD44细胞，对大肠癌细胞具有沉默效果。本发明制备工艺简单，成本低，制备的siRNA核酸脂质体粒径较小，具有良好的生物相容性及稳定性，具有NEDD4靶向性，有利于基因药物在体内的靶向运输，实现基因药物体内循环和对NEDD4高表达肿瘤的靶向沉默效果。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种靶向NEDD4基因的siRNA核酸脂质体及其用途。

背景技术

结肠直肠癌（CRC）是世界上第三大常见的恶性肿瘤，复发率、病死率极高。如何提高结肠直肠癌的治愈率及减少其复发性，成为亟需解决的问题。目前结肠直肠癌主要的治疗手段为手术治疗（腹腔镜或开腹手术）、单抗治疗、外泌体治疗，鲜有用小核酸技术进行结肠直肠癌的治疗。2001年发现RNA具有基因沉默功能，可以指导互补信使RNA的转录后降解，小干扰RNA（siRNA）为21~23个核苷酸的双链RNA分子，通过在两条siRNA链之一的互补位点诱导mRNA清除来负向调节基因表达，通过敲除涉及疾病发展的特定基因。目前，siRNA可以作为药用活性分子而达到治疗癌症的目的。

NEDD4是细胞生存的基本基因，被认为是原癌基因。NEDD4基因是在ENaC中通过WW结构域结合PY模体，介导钠离子通道的下调。现有研究表明NEDD4能泛素化PTEN 和ERBB1/2/3/4，导致蛋白质降解和/或改变细胞内定位。在大肠癌中，NEDD4的损耗并不影响PTEN蛋白水平或者PI3K/AKT信号通路，同时PTEN野生型和变异型结肠肿瘤中，NEDD4表达也不存在明显差异，从而证明NEDD4独立于PTEN和PI3K/AKT信号通路促进大肠癌细胞的生长，siRNA沉默NEDD4基因被证明具有治疗结肠直肠癌、大肠癌的效果。siRNA干扰作为一种新型的治疗手段应用于结肠直肠癌及大肠癌的治疗，其具有特异性高，无免疫原性等优点，但由于siRNA具有易被核酸酶降解，表面带负电性，难以通过细胞膜和靶向性差造成siRNA药物使其临床应用较少，目前还没有将siRNA沉默 NEDD4基因用于结肠直肠癌、大肠癌等治疗药物中的研究。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的不足，提供一种靶向NEDD4基因的siRNA核酸脂质体及其用途。本发明通过脂质体组分与NEDD4抑制剂的结合形成siRNA核酸脂质体，通过细胞膜从而靶向沉默NEDD4基因，实现了NEDD4靶向药物的制备。制备工艺简单、稳定性好，可提高结肠直肠癌治疗效率，对基因药物用于靶向治疗NEDD4高表达肿瘤的癌症治疗具有重要意义。

为实现本发明的目的，采用的具体技术方案如下：

本发明提供了一种靶向NEDD4基因的siRNA核酸脂质体，所述的siRNA核酸脂质体包含脂质体组分和NEDD4抑制剂；在一个具体实施方案中，所述的siRNA核酸脂质体包含脂质体组分和NEDD4抑制剂；所述的脂质体组分包括DOTAP、Chol、DSPC和DSPE-PEG2000；所述NEDD4抑制剂为靶向NEDD4的siRNA，siRNA的正义链为5′-UUCAAUUGCCAUCUGAAGUUUAUCC-3′，反义链为3′-CCUAUUUGAAGUCUACCGUUAACUU-5′。

在一个具体实施方案中，所述脂质体组分中DOTAP、Chol、DSPC和DSPE-PEG2000的摩尔比为30~50：35~45：9~11：6~8。

在一个具体实施方案中，所述脂质体组分中DOTAP、Chol、DSPC和DSPE-PEG2000的摩尔比为40:40:10:7。