[发明专利]感觉/运动神经施万细胞和成纤维细胞的体外培养方法

权利要求书

1.一种感觉/运动神经施万细胞和成纤维细胞的体外培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）利用解剖学结构获取感觉神经和运动神经，将其消化培养后获得混合生长的感觉/运动神经施万细胞和成纤维细胞；

（2）差速消化法结合差速贴壁法分离出感觉与运动施万细胞并收集；

（3）差速消化法结合差速贴壁法分离出感觉与运动成纤维细胞并收集。

2.根据权利要求1所述的感觉/运动神经施万细胞和成纤维细胞的体外培养方法，其特征在于，步骤（2）的具体步骤为：在培养皿中加入0.25%胰酶停留10s后迅速加入完全培养基终止消化，施万细胞变圆，轻轻吹打细胞，施万细胞脱落，而成纤维细胞仍然紧贴皿底，收集施万细胞接种至新的培养皿培养30min，此时施万细胞中夹杂的少量成纤维细胞已经贴壁，通过差速贴壁法收集含未贴壁施万细胞的上清接种在多聚赖氨酸预包被的培养皿中培养，培养2天后重复步骤（2）一遍，培养2-3天至细胞铺满皿底，胰酶消化后收集施万细胞用于后续研究。

3.根据权利要求1所述的感觉/运动神经施万细胞和成纤维细胞的体外培养方法，其特征在于，步骤（3）的具体步骤为：步骤（2）中经差速消化法去除施万细胞后，培养皿中剩余的成纤维细胞加入0.25% 胰酶消化2-3min，加入完全培养基终止消化，收集成纤维细胞，然后离心接种在培养皿中培养30 min，至大部分成纤维细胞已经贴壁，弃去上清中残留的少量施万细胞，加完全培养基培养2天后重复步骤（3）一遍，培养2-3天至细胞铺满皿底，胰酶消化后收集成纤维细胞用于后续研究。

4.根据权利要求1所述的感觉/运动神经施万细胞和成纤维细胞的体外培养方法，其特征在于，还包括步骤（4）感觉/运动神经施万细胞和成纤维细胞的纯度鉴定。

5.根据权利要求4所述的感觉/运动神经施万细胞和成纤维细胞的体外培养方法，其特征在于，步骤（4）中采用免疫细胞化学染色鉴定感觉/运动施万细胞和成纤维细胞纯度。

6.根据权利要求4所述的感觉/运动神经施万细胞和成纤维细胞的体外培养方法，其特征在于，步骤（4）中采用流式细胞仪检测感觉与运动施万细胞和成纤维细胞纯度。