[发明专利]一种生产次丹参酮二烯的重组酵母工程菌

权利要求书

1.一种生产次丹参酮二烯的重组酵母工程菌，所述重组酵母工程菌能发酵生产GGPP，其特征在于，在所述重组酵母菌中包含II类二萜合酶基因CfTPS1，以及I类二萜合酶基因SmKSL1。

2.根据权利要求1所述的生产次丹参酮二烯的重组酵母工程菌，其中所述II类二萜合酶基因CfTPS1和I类二萜合酶基因SmKSL1以SmKSL1-CfTPS1的方式融合。

3.根据权利要求2所述的生产次丹参酮二烯的重组酵母工程菌，其中II类二萜合酶基因CfTPS1和I类二萜合酶基因SmKSL1通过柔性肽GGGS相连。

4.根据权利要求2所述的生产次丹参酮二烯的重组酵母工程菌，其中所述SmKSL1-CfTPS1融合基因SmKSL1的N端进行了截短，所述截短的方式为N端的叶绿体转运肽S2-C47。

5.根据权利要求4所述的生产次丹参酮二烯的重组酵母工程菌，其中所述SmKSL1-CfTPS1融合基因SmKSL1的N端进行了截短，所述截短的方式为N端的叶绿体转运肽S2-C47，并且还在CfTPS1的N端也进行了截短，截短的方式为N端转运肽M2-N81。

6.根据权利要求1-5中任意一权利要求所述的生产次丹参酮二烯的重组酵母工程菌，其中所述重组酵母工程菌过表达融合酶基因BTS1/ERG20、牻牛儿牻牛儿基焦磷酸合酶基因SaGGPS和HMG-CoA还原酶基因的催化活性域tHMG1。

7.根据权利要求6所述的生产次丹参酮二烯的重组酵母工程菌，其中所述重组酵母工程菌敲除了ROX1基因、YJL064w基因、YPL062w基因或ERG9启动子激活域(ERG9p)中的任意一种或多种。

8.根据权利要求1-7中任意一权利要求所述的生产次丹参酮二烯的重组酵母工程菌，其中所述酵母工程菌为GEN.PK系酿酒酵母菌或BY系酿酒酵母菌。

9.根据权利要求8所述的生产次丹参酮二烯的重组酵母工程菌，其中所述BY系酿酒酵母菌为BY4741酿酒酵母、BY4742酿酒酵母或BY-T20酿酒酵母，所述BY-T20的基因型为：MATαtrp1Δ0leu2Δ0ura3Δ0,trp1::HIS3-P_PGK1-BTS1/ERG20-T_ADH1-P_TDH3-SaGGPS-T_TPI1-P_TEF1-tHMG1-T_CYC1。

10.一种生产次丹参酮二烯的方法，所述方法包括：

将生产次丹参酮二烯的重组酵母工程菌转入培养基中，进行发酵，提取分离发酵后的菌液，得到目标产物次丹参酮二烯，其中，所述重组酵母工程菌能发酵生产GGPP，并且所述重组酵母工程菌包含：选自II类二萜合酶基因CfTPS1以及选自I类二萜合酶基因SmKSL1。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述重组酵母工程菌包含：II类二萜合酶基因CfTPS1，以及I类二萜合酶基因SmKSL1通过SmKSL1-CfTPS1的方式融合。

12.根据权利要求11所述的生产次丹参酮二烯的方法，其中II类二萜合酶基因CfTPS1和I类二萜合酶基因SmKSL1通过柔性肽GGGS相连。

13.根据权利要求11所述的生产次丹参酮二烯的方法，其中所述SmKSL1-CfTPS1融合基因SmKSL1的N端进行了截短，所述截短的方式为N端的叶绿体转运肽S2-C47。