[发明专利]一种用于新型冠状病毒扩增引物及其应用

说明书

本发明涉及一种新型冠状病毒扩增引物及其应用。该引物包括至少一个能够识别新型冠状病毒N基因上的特异区域的寡核苷酸引物，新型冠状病毒N基因上的特异区域的序列范围包括新型冠状病毒参考毒株基因组28778‑28971的区域序列。采用该引物可以快速地从血液、唾液、痰液、空气等样本提取的RNA中的检测新型冠状病毒核酸，具有简便、快速，不需要大型仪器和专业人员培训的优点，可作为新型冠状病毒感染的肺炎疑似病例的初筛、环境检测方法，亦可作为临床诊断的重要参考。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种用于新型冠状病毒扩增引物及其应用。

背景技术

目前，新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019，COVID-19) 在没有确切疗效的治疗药物和疫苗预防前提下，精准诊断、隔离病患仍是防止疫情传播最为有效的防控措施。因此，快速、特异、灵敏的病原检测对于新型冠状病毒肺炎的科学防控至关重要。

COVID-19的临床诊断主要基于流行病学史，临床表现和一些辅助检查，例如核酸检测，CT扫描，免疫识别技术(IgM/IgG的即时检测(POCT)，酶联免疫吸附测定(ELISA))和血液培养。在核酸检测技术领域， SARS-CoV-2的两种常用核酸检测技术是实时定量聚合酶链反应 (RT-qPCR)和高通量测序。SARS-CoV-2的权威鉴定方法是病毒血培养和全基因组高通量测序。然而，高通量测序技术由于其设备依赖性和成本高，在临床诊断中的应用受到限制。因此，RT-qPCR是检测呼吸道分泌物和血液中致病性病毒最常用、最有效、最直接的方法。在COVID-19爆发之初，许多公司很快推出了用于临床诊断的RT-qPCR测试试剂盒。已有报道采用两种1步RT-qPCR分析(基于TaqMan的荧光信号)分别检测病毒基因组的两个不同区域。通过该方法，阴性对照样品均被确认为阴性样品，而来自呼吸道标本的两名SARS-CoV-2感染患者样品被确认为阳性样品。另一项研究表明，使用RT-qPCR(基于非探针SYBR的荧光信号)在患者自行收集的唾液中SARS-CoV-2的阳性率为91.7％(11/12)，这表明唾液是一种有前景的非侵入性标本，可用于SARS-CoV-2感染患者的诊断，监测和感染控制。RT-qPCR检测对SARS-CoV和MERS-CoV感染也具有较高的敏感性和特异性。

虽然RT-qPCR方法具有显而易见的优势，然而，该方法也存在着灵敏度低、仪器和人员依赖性强等缺点。研究表明，目前使用的RT-qPCR检测 SARS-CoV的灵敏度只能达到50％-79％，这取决于使用的方案、样本类型和采集的临床样本数量。因此，提高对SARS-CoV-2感染的RT-qPCR的检测率至关重要。此外，RT-qPCR还存在其他一些缺点，包括由于患者样品的保存和操作，核酸检测操作繁琐以及结果等待时间长而带来的某些生物安全隐患，此外，该方法需要精密昂贵仪器和高素质操作人员，难以在基层检测机构推广和普及。因此，亟需开发特异性强、敏感性高兼具高效、快捷、可视化的检测产品(技术)，用于医院、社区和居家隔离、环境检测的有效补充。