[发明专利]用于水果黄瓜绿美1号种子纯度鉴定的SSR引物及方法

权利要求书

1.一种用于水果黄瓜绿美1号种子纯度鉴定的SSR引物，其特征在于，所述引物包括上游引物SSR17922-F和下游引物SSR17922-R，其中上游引物SSR17922-F为：5'-CATTCTAGGTCAATGAATCGCA -3'，下游引物SSR17922-R为：5'- GCAAAGTTGCCACATTGAAG -3'。

2.一种采用权利要求1所述的引物鉴定水果黄瓜绿美1号种子纯度的方法，其特征在于，包括以下步骤：

A.通过改良的CTAB法提取绿美1号叶片基因组DNA；

B.将提取的绿美1号叶片基因组DNA通过所述的引物进行PCR扩增，然后再进行检测。

3.根据权利要求2所述的引物鉴定水果黄瓜绿美1号种子纯度的方法，其特征在于，所述改良的CTAB法提取绿美1号叶片基因组DNA，包括以下步骤：

A1.取新鲜叶片30mg放入2ml的离心管中，加入一个直径4mm的钢珠，盖紧盖子，将其放入液氮中60s，然后利用组织研磨仪磨样90s；

A2.磨好样后，加入600µl CTAB提取液，55℃水浴30min，每隔5min上下翻转混匀一次；

A3.12000rpm离心5min，吸取400µl上清于干净的1.5ml的离心管中，加入250µl氯仿和异戊醇混合物（24氯仿：1异戊醇），充分混匀；

A4.13000rpm离心120s，取300µl上清于另一新的1.5ml离心管中，加入在-20℃条件下提前预冷的无水乙醇600µl，混匀， -20℃冰箱放置2h；

A5.12000rpm离心10min，倒掉上清液，室温放置；

A6.待离心管中无酒精味时，加入100µl ddH2O溶解DNA。

4.根据权利要求2所述的引物鉴定水果黄瓜绿美1号种子纯度的方法，其特征在于，所述PCR扩增及检测，包括以下步骤：

B1.通过扩增仪进行PCR扩增，反应体系为15μL，包括7.5μL 2×Taq MasterMix，1μLDNA，10μM的正反向引物各0.5μL，5.5μL ddH2O，反应程序为94℃预变性2min，[94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s]，38个循环， 72℃延伸2min，然后反应保持在4℃；

B2.在8％聚丙烯酰胺凝胶电泳上分离PCR扩增的片段，进行银染，并在白光下显现。