[发明专利]基于PCR-RFLP的家栖鼠常见鼠种快速鉴定方法

权利要求书

1.基于PCR-RFLP的家栖鼠常见鼠种快速鉴定方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)采集鼠类动物组织或排泄物标本；(2)提取标本总核酸；(3)PCR扩增鼠线粒体Cyt-b基因的完整片段，包含上下游非编码序列，其目的片段长度为1242bp；(4)同时采用两种限制性核酸内切酶BamH1和EcoRI对上述PCR产物进行酶切；(5)将酶切产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳后，在荧光成像系统中进行图谱分析；

步骤(3)中，用于扩增Cyt-b基因的引物对的序列如下：

序列为SEQ ID NO.1的H6：5’-TCTTCATTTYTGGTTTACAAGACCA-3’；

序列为SEQ ID NO.2的L7：5’-ACYAATGACATGAAAAATCATCGTTG-3’。

2.根据权利要求1所述的鼠种快速鉴定方法，其特征在于：步骤(1)中，鼠类标本为内脏、血液、肌肉组织、排泄物或其他富含鼠类遗传物质的标本。

3.根据权利要求1所述的鼠种快速鉴定方法，其特征在于：步骤(3)中，用于基因扩增的PCR反应体系为：DNA模板2μL，H6和L7引物各2μL，Taq Master Mix 25μL，ddH₂O19μL。

4.根据权利要求1所述的鼠种快速鉴定方法，其特征在于：步骤(3)中，用于基因扩增的PCR反应条件为：94℃预变性3～5min，94℃变性1min，52～55℃退火1min，72℃延伸1min，32～35个循环，最后再72℃延伸5～10min。

5.根据权利要求1所述的鼠种快速鉴定方法，其特征在于：步骤(4)中，酶切反应体系为：步骤(3)所得PCR产物10μL，限制性内切酶BamH1和EcoRI各1μL，酶切缓冲液2μL，ddH₂O16μL；37℃水浴5min。