[发明专利]一种用于检测血流感染致病菌及耐药基因的试剂盒

说明书

本发明涉及一种用于检测血流感染致病菌及耐药基因的试剂盒，其包括用于多重不对称PCR反应的引物对、以及含有探针的基因芯片；引物对包括对应于屎肠球菌鉴定基因msrC、对应于粪肠球菌鉴定基因FC‑DDL、对应于嗜麦芽窄食单胞菌鉴定基因smeD、对应于DHA1的引物对中的一种或多种；探针包括对应于屎肠球菌、对应于粪肠球菌、对应于嗜麦芽窄食单胞菌、对应于DHA1的探针中的一种或多种。本发明能在一管内检测致病菌及耐药基因，并且多重不对称PCR反应可以在1管中进行，无需分成多管，节约了原料和样本的用量，本发明操作简便，准确性高，可重复性强，可在4.5小时内出结果，对于临床医生的用药有一定的指导意义。

技术领域

本发明具体涉及一种用于检测血流感染致病菌及耐药基因的试剂盒。

背景技术

血流感染(bloodstream infection，BSI)，是临床上重症感染性疾病之一，根据症状不同可分为败血症、脓毒症和脓毒性休克，具有较高的发病率和致死率，其常见感染源包括细菌、真菌。现阶段，血流感染诊断的金标准是血培养，通过生化方法或显微镜观察确定病原体，但该方法耗时长，通常需要数天时间才能确定结果，且对于难培养或无法培养的病原体，则难以准确检测。在缺乏准确诊断结果的情况下，临床医师为了缓解病症，可能盲目使用抗生素，导致患者的生存率降低、细菌耐药性的出现以及治疗费用的增加等。

《社区获得性血流感染流行病学特征和耐药分析》，安徽省铜陵市人民医院感染科，查翔远等通过回顾性分析2015年1月-2016年12月铜陵市人民医院所有确诊为社区获得性血流感染(CABSI)患者的临床及血培养资料，结果共152例CABSI患者纳入研究，原发性血流感染占24.3％(37/152)，继发性血流感染占75.7％(115/152)。152例患者共分离出非重复病原菌152株，其中革兰氏阴性菌占63.8％(97/152株)，革兰氏阳性菌占36.2％(55/152株)。最常见的检出菌依次为大肠埃希氏菌(48.7％)、凝固酶阴性葡萄球菌(11.8％)、肺炎克雷伯菌(9.2％)、金黄色葡萄球菌(7.2％)、草绿色链球菌(6.6％)、β-溶血性链球菌(4.6％)。

然而，市场上现有的检测试剂盒中，大都涵盖菌株范围较小，或者针对耐药基因的位点较少，这些试剂盒的灵敏度较低，往往不能达到阳性检测的效果。此外，目前的一些试剂盒中的检测样本时间长，使得这类试剂盒不能满足临床快速诊断的目的。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种可以采用基因芯片-多重不对称PCR法检测血流感染致病菌和耐药基因的试剂盒。

为解决以上技术问题，本发明采取如下技术方案：

本发明一方面提供一种用于检测血流感染致病菌及耐药基因的试剂盒，所述的试剂盒包括用于多重不对称PCR反应的引物对、以及含有探针的基因芯片；

所述的引物对包括对应于屎肠球菌鉴定基因msrC的引物对、对应于粪肠球菌鉴定基因FC-DDL的引物对、对应于嗜麦芽窄食单胞菌鉴定基因smeD的引物对、对应于耐药基因β-内酰胺酶C类AmpC酶DHA1的引物对中的一种或多种；

所述的探针包括主体序列以及在所述的主体序列的5’端标记的多个碱基T，至少部分所述的引物对和至少部分所述的探针对应于同一种血流感染致病菌或耐药基因；

所述的探针包括对应于屎肠球菌的探针、对应于粪肠球菌的探针、对应于嗜麦芽窄食单胞菌的探针、对应于β-内酰胺酶C类AmpC酶DHA1的探针中的一种或多种。

当本发明的试剂盒同时含有致病菌和耐药基因的引物对和探针时，本发明的试剂盒可以同时检测血流感染致病菌和耐药基因。

本发明中，主体序列的5’端标记的碱基T的个数为8～16个，优选为9～15个，优选为10～14个，优选为11～13个，最优选为12个。