[发明专利]一种半抗原及其在检测雷公藤乙素和雷公藤甲素方面的应用有效

专利信息
申请号: 202010244574.9 申请日: 2020-03-31
公开(公告)号: CN111440185B 公开(公告)日: 2021-05-14
发明(设计)人: 杨术鹏;李熠;周金慧;傅怡;张金震;金钥;杨宇辉;黄京平;袁媛;赵文 申请(专利权)人: 中国农业科学院蜜蜂研究所
主分类号: C07K14/765 分类号: C07K14/765
代理公司: 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 代理人: 陈征
地址: 100093*** 国省代码: 北京;11
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摘要:
搜索关键词: 一种 半抗原 及其 检测 雷公藤 方面 应用
【权利要求书】:

1.一种半抗原,其特征在于,具有如下结构:

2.权利要求1所述的半抗原的制备方法,其特征在于,反应路径如下:

具体为:将雷公藤乙素与琥珀酸酐在55~65℃下反应得到。

3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述反应在吡啶中进行;

所述雷公藤乙素与所述琥珀酸酐的质量比为10:(3~5);

所述反应在避光条件下进行;

所述反应在220~260rpm下进行7~9h。

4.根据权利要求2或3所述的制备方法,其特征在于,在所述反应后,还包括纯化过程,所述纯化过程具体为:用乙酸乙酯萃取反应产物后,用稀盐酸洗涤有机相,在有机相干燥浓缩后,经C18色谱柱分离纯化,即得。

5.一种人工抗原,其特征在于,由权利要求1所述的半抗原与载体蛋白偶联后得到;

其中,所述载体蛋白选自牛血清白蛋白、卵清蛋白、钥孔血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白中的一种或几种。

6.权利要求5所述的人工抗原的制备方法,其特征在于,通过碳二亚胺、活泼酯法或混合酸酐法使所述半抗原与载体蛋白偶联。

7.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,包括:

(1)称取摩尔比为1:(1.8~2.2):(1.8~2.2)的所述半抗原、N-羟基琥珀酰亚胺和二环己基碳二亚胺,用N,N-二甲基甲酰胺溶解后得到反应液,将所述反应液在350~400rpm下室温避光反应4~6h,离心取上清,获得半抗原活化液;

按终浓度为4.5~5.5mg/mL将所述载体蛋白溶于磷酸盐缓冲液中,得到载体蛋白溶液;

(2)将所述半抗原活化液滴入所述载体蛋白溶液中,使所述半抗原与载体蛋白的摩尔比达到(18~22):1,4℃搅拌反应过夜。

8.一种多克隆抗体,其特征在于,以权利要求5所述的人工抗原为免疫原,免疫动物制备得到。

9.权利要求1所述的半抗原或权利要求5所述的人工抗原在以下任一方面的应用:

①在制备抗雷公藤乙素和雷公藤甲素特异性抗体中的应用;

②在制备检测抗雷公藤乙素和雷公藤甲素特异性抗体的试剂中的应用。

10.权利要求8所述的多克隆抗体在以下任一方面的应用:

(1)在制备检测雷公藤乙素和雷公藤甲素药物的试剂中的应用;

(2)在制备雷公藤乙素和雷公藤甲素的免疫层析试纸条中的应用;

(3)在制备雷公藤乙素和雷公藤甲素的酶联免疫分析试剂盒中的应用;

(4)在检测有毒蜂蜜中的应用。

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