[发明专利]一种半抗原及其在检测雷公藤乙素和雷公藤甲素方面的应用有效
申请号: | 202010244574.9 | 申请日: | 2020-03-31 |
公开(公告)号: | CN111440185B | 公开(公告)日: | 2021-05-14 |
发明(设计)人: | 杨术鹏;李熠;周金慧;傅怡;张金震;金钥;杨宇辉;黄京平;袁媛;赵文 | 申请(专利权)人: | 中国农业科学院蜜蜂研究所 |
主分类号: | C07K14/765 | 分类号: | C07K14/765 |
代理公司: | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人: | 陈征 |
地址: | 100093*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 半抗原 及其 检测 雷公藤 方面 应用 | ||
1.一种半抗原,其特征在于,具有如下结构:
2.权利要求1所述的半抗原的制备方法,其特征在于,反应路径如下:
具体为:将雷公藤乙素与琥珀酸酐在55~65℃下反应得到。
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述反应在吡啶中进行;
所述雷公藤乙素与所述琥珀酸酐的质量比为10:(3~5);
所述反应在避光条件下进行;
所述反应在220~260rpm下进行7~9h。
4.根据权利要求2或3所述的制备方法,其特征在于,在所述反应后,还包括纯化过程,所述纯化过程具体为:用乙酸乙酯萃取反应产物后,用稀盐酸洗涤有机相,在有机相干燥浓缩后,经C18色谱柱分离纯化,即得。
5.一种人工抗原,其特征在于,由权利要求1所述的半抗原与载体蛋白偶联后得到;
其中,所述载体蛋白选自牛血清白蛋白、卵清蛋白、钥孔血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白中的一种或几种。
6.权利要求5所述的人工抗原的制备方法,其特征在于,通过碳二亚胺、活泼酯法或混合酸酐法使所述半抗原与载体蛋白偶联。
7.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,包括:
(1)称取摩尔比为1:(1.8~2.2):(1.8~2.2)的所述半抗原、N-羟基琥珀酰亚胺和二环己基碳二亚胺,用N,N-二甲基甲酰胺溶解后得到反应液,将所述反应液在350~400rpm下室温避光反应4~6h,离心取上清,获得半抗原活化液;
按终浓度为4.5~5.5mg/mL将所述载体蛋白溶于磷酸盐缓冲液中,得到载体蛋白溶液;
(2)将所述半抗原活化液滴入所述载体蛋白溶液中,使所述半抗原与载体蛋白的摩尔比达到(18~22):1,4℃搅拌反应过夜。
8.一种多克隆抗体,其特征在于,以权利要求5所述的人工抗原为免疫原,免疫动物制备得到。
9.权利要求1所述的半抗原或权利要求5所述的人工抗原在以下任一方面的应用:
①在制备抗雷公藤乙素和雷公藤甲素特异性抗体中的应用;
②在制备检测抗雷公藤乙素和雷公藤甲素特异性抗体的试剂中的应用。
10.权利要求8所述的多克隆抗体在以下任一方面的应用:
(1)在制备检测雷公藤乙素和雷公藤甲素药物的试剂中的应用;
(2)在制备雷公藤乙素和雷公藤甲素的免疫层析试纸条中的应用;
(3)在制备雷公藤乙素和雷公藤甲素的酶联免疫分析试剂盒中的应用;
(4)在检测有毒蜂蜜中的应用。
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