[发明专利]一种半抗原及其在检测雷公藤乙素和雷公藤甲素方面的应用

说明书

本发明属于生物化工技术领域，具体涉及一种半抗原及其在检测雷公藤乙素和雷公藤甲素方面的应用。所述半抗原具有如下结构：其完全抗原不但可将雷公藤乙素的化学结构暴露出来，还可将雷公藤乙素和雷公藤甲素共有的化学结构暴露出来作为抗原决定簇，其抗体可同时识别雷公藤甲素(IC₅₀可达1.2ng/mL)和雷公藤乙素(IC₅₀可达0.86ng/mL)。这为高灵敏度、高特异性抗体的制备奠定了基础，为建立快速、简便、价廉、灵敏、特异的雷公藤甲素及雷公藤乙素的检测方法提供了新手段。

技术领域

本发明涉及生物化工技术领域，具体涉及一种半抗原及其在检测雷公藤乙素和雷公藤甲素方面的应用。

背景技术

雷公藤乙素(Tripdiolide)是从中药植物雷公藤中提取的一种活性物质，属于雷公藤二萜类物质。药理学研究结果表明雷公藤乙素具有良好的抗炎、抗肿瘤和免疫调节等活性，但是该化合物由于具有较强的肾脏毒性和胃肠道毒性，且治疗剂量与毒性剂量相近，导致其治疗的安全窗口较窄，限制了其在临床医学上的应用。但是由于雷公藤在治疗类风湿性关节炎、红斑狼疮和小儿紫癜等方面疗效确切，雷公藤提取物已经作为中药得到广泛应用。雷公藤乙素作为雷公藤中药提取物的活性成分之一，准确测定其含量对于评估药物的有效性和安全性尤为关键。

近年来，陆续爆发了多起因食用蜂蜜而致人中毒、甚至死亡的群体性事件。通过对有毒蜂蜜样本检测分析发现，这些问题蜂蜜中含有高浓度的雷公藤二萜类物质，如雷公藤甲素和雷公藤乙素等，其中雷公藤乙素的含量尤其较高，是雷公藤甲素的10-20倍。雷公藤甲素和乙素的毒性大致相当，均属于剧毒性物质，可见两者是导致蜂蜜中毒的关键性物质。如何准确定量检测蜂蜜中的雷公藤乙素和雷公藤甲素对规避蜂蜜中毒和中毒患者的快速诊断方面尤为重要。

当前，雷公藤乙素和雷公藤甲素的定量检测方法主要是采用高效液相色谱仪和液相串联质谱等仪器。仪器分析需要用到大型仪器设备、且对分析人员的专业知识和技能要求较高。样本的分析成本较高、耗时较长，难以满足实际现场快速检测的需要。免疫分析具有分析成本低、操作简单快速、方法灵敏特异等优点，已经在各领域得到广泛的应用。早期研究人员已经开发了雷公藤甲素的免疫分析方法，并且取得了良好的检测效果，但是由于雷公藤乙素和甲素在化学结构存在一定差异，制备的雷公藤甲素抗体并不能有效地识别雷公藤乙素。这主要是与雷公藤甲素半抗原的设计有关。

发明内容

(一)要解决的技术问题

本发明针对当前雷公藤乙素和雷公藤甲素检测抗体匮乏的现状，通过设计和改造其半抗原，以期获得优异抗体，从而为后续雷公藤乙素和雷公藤甲素检测试剂盒和胶体金检测卡等快速检测产品的开发提供基础。

(二)技术方案

本发明第一目的在于提供一种半抗原，具有如下结构：

本发明第二目的在于提供所述的半抗原的制备方法，反应路径如下：

具体为：将雷公藤乙素与琥珀酸酐在55～65℃下反应得到；优选所述反应的温度为58～62℃，更优选为60℃。

本发明发现，在上述条件下，可以在雷公藤乙素的特定羟基位点引入间隔臂(琥珀酸酐)，获得本发明所述的半抗原。

在此基础上，本发明进一步对制备方法进行了优化，得到如下方案：

在一些优选方案中，所述反应在在吡啶中进行；优选所述的吡啶为无水吡啶。

在一些优选方案中，所述雷公藤乙素与所述琥珀酸酐的质量比为10：(3～5)。

在一些优选方案中，所述反应在避光条件下进行。

在一些优选方案中，所述反应在220～260rpm下进行7～9h。