[发明专利]检测喷气燃料中球毛壳菌引物、应用及检测方法

权利要求书

1.一种检测真菌球毛壳菌的引物，其特征在于，包括：外引物F3和B3，内引物FIP和BIP，一条环引物LB；

所述的外引物F3序列如SEQ ID NO.1所示，所述的外引物B3序列如SEQ ID NO.2所示，所述的内引物FIP序列如SEQ ID NO.3所示，所述的内引物BIP序列如SEQ ID NO.4所示，所述的环引物LB序列如SEQ ID NO.5所示。

2.根据权利要求1所述的检测真菌球毛壳菌的引物，其特征在于，所述的内引物FIP的5’端进行生物素标记。

3.一种真菌球毛壳菌检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

以球毛壳菌的基因组DNA作为模板进行扩增，LAMP反应体系引物浓度为：外引物F3和B3各0.2μmol/L，内引物FIP和BIP各1.6μmol/L，环引物LB 0.8μmol/L；LAMP预混液为：20mmol/L Tris-HCl，10mmol/L KCl，8mmol/L MgSO₄，10mmol/L(NH4)₂SO₄，体积百分含量0.1％吐温20，0.8mol/LBetaine，1.4mmol/L dNTPs，8U/μL Bst DNA聚合酶；

球毛壳菌的LAMP反应体系为：LAMP预混液：10ml，FIP：2.5ml，BIP：2.5ml，LB：0.95ml，F3：0.3ml，B3：0.3ml，待测样品DNA模板：2ml；去离子水：1.45ml；

采用引物和LAMP反应体系，温度为65℃下进行LAMP扩增反应45min，LAMP扩增反应结束后，取LAMP反应产物8μL，加入到100μL LFD分析缓冲液中得到混合溶液，将LFD试纸条插入所述的混合溶液中，等待1min，取出试纸条观察结果，如果LFD试纸条呈阳性，表示待测样品中含有球毛壳菌；如果LFD试纸条呈阴性，表示待测样品中不含有球毛壳菌；

所述的引物为权利要求1或2所述的引物。

4.一种检测真菌球毛壳菌的检测方法在喷气燃料真菌检测中的应用，其特征在于，所述的检测方法为权利要求3中所述的检测方法。

5.根据权利要求4所述的检测真菌球毛壳菌的检测方法在喷气燃料真菌检测中的应用，其特征在于，将喷气燃料进行如下处理后进行检测：取喷气燃料样品500mL经0.22μm滤膜抽滤，收集滤膜并用1mL 10％的Chelex-100溶液反复洗脱，洗脱液收集于1.5mL的离心管内，后将离心管放入金属浴中100℃恒温5min，然后将离心管放入－20℃冰箱5min，重复三次，最后离心管经12000r/min离心5min，吸取上清液至1.5mL离心管中，得到待测样品DNA模板，用于检测。