[发明专利]检测喷气燃料中球毛壳菌引物、应用及检测方法

说明书

本发明属于生物检测技术领域，本发明公开了一种检测喷气燃料中球毛壳菌引物、应用及检测方法。其中，检测真菌球毛壳菌的引物，包括：外引物F3和B3，内引物FIP和BIP，一条环引物LB；所述的外引物F3序列如SEQ ID NO.1所示，所述的外引物B3序列如SEQ ID NO.2所示，所述的内引物FIP序列如SEQ ID NO.3所示，所述的内引物BIP序列如SEQ ID NO.4所示，所述的环引物LB序列如SEQ ID NO.5所示。本发明的检测方法具有灵敏度高和特异性强的优点。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种检测喷气燃料中球毛壳菌引物、应用及检测方法。

背景技术

本发明对于背景技术的描述属于与本发明相关的相关技术，仅仅是用于说明和便于理解本发明的发明内容，不应理解为申请人明确认为或推定申请人认为是本发明在首次提出申请的申请日的现有技术。

微生物给航空燃料带来的污染问题，可能会导致燃料的质量下降，加快管线和储罐的腐蚀，堵塞过滤器并威胁飞行安全。喷气燃料中的微生物，既影响了油料的洁净度和储存安定性，又对装备使用安全带来危害，成为困扰我国航空油料质量管理的一大难题。采用新一代Illumina MiSeq高通量测序方法对储罐中喷气燃料微生物多样性开展研究，结果发现了喷气燃料中出现了球毛壳(Chaetomium globosum)污染。

目前的检测方法主要为PCR技术，而这种方法灵敏度和特异性都不能满足日益发展的需要。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测喷气燃料中球毛壳菌引物、应用及检测方法，本发明的方法具有灵敏度高和特异性强的优点。

第一方面，本发明提供了一种检测真菌球毛壳菌的引物，包括：外引物F3和B3，内引物FIP和BIP，一条环引物LB；

所述的外引物F3序列如SEQ ID NO.1所示，所述的外引物B3序列如SEQ ID NO.2所示，所述的内引物FIP序列如SEQ ID NO.3所示，所述的内引物BIP序列如SEQ ID NO.4所示，所述的环引物LB序列如SEQ ID NO.5所示。

进一步的，所述的内引物FIP的5’端进行生物素标记。

第二方面，本发明提供了一种真菌球毛壳菌检测方法，包括如下步骤：

以球毛壳菌的基因组DNA作为模板进行扩增，LAMP反应体系引物浓度为：F3和B3各0.2μmol/L，FIP和BIP各1.6μmol/L，LB各0.8μmol/L；LAMP预混液为：20mmol/L Tris-HCl，10mmol/L KCl，8mmol/L MgSO₄，10mmol/L(NH4)₂SO₄，体积百分含量0.1％吐温20，0.8mol/LBetaine，1.4mmol/LdNTPs，8U/μLBst DNA聚合酶；

球毛壳菌(Chaetomium globosum)的LAMP反应体系为：LAMP预混液：10ml，FIP：2.5ml，BIP：2.5ml，LB：0.95ml，F3：0.3ml，B3：0.3ml，待测样品DNA模板：2ml；去离子水：1.45ml；

采用引物和LAMP反应体系，温度为65℃下进行LAMP扩增反应45min，LAMP扩增反应结束后，取LAMP反应产物8μL，加入到100μL LFD分析缓冲液中得到混合溶液，将LFD试纸条插入所述的混合溶液中，等待1min，取出试纸条观察结果，如果LFD试纸条呈阳性，表示待测样品中含有球毛壳菌；如果LFD试纸条呈阴性，表示待测样品中不含有球毛壳菌；

所述的引物为上述的引物。

第三方面，本发明提供了一种检测真菌球毛壳菌的检测方法在喷气燃料真菌检测中的应用，所述的检测方法为上述的检测方法。