[发明专利]检测喷气燃料中硫酸盐还原菌引物、应用及检测方法

说明书

本发明属于生物检测技术领域，本发明公开了一种检测喷气燃料中硫酸盐还原菌引物、应用及检测方法。引物包括：外引物F3和B3，内引物FIP和BIP，两条环引物LB和LF；所述的外引物F3序列如SEQ ID NO.1所示，所述的外引物B3序列如SEQ ID NO.2所示，所述的内引物FIP序列如SEQ ID NO.3所示，所述的内引物BIP序列如SEQ ID NO.4所示，所述的环引物LB序列如SEQ ID NO.5所示，所述的环引物LF序列如SEQ ID NO.6所示。本发明的方法具有灵敏度高和特异性强的优点。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种检测喷气燃料中硫酸盐还原菌引物、应用及检测方法。

背景技术

本发明对于背景技术的描述属于与本发明相关的相关技术，仅仅是用于说明和便于理解本发明的发明内容，不应理解为申请人明确认为或推定申请人认为是本发明在首次提出申请的申请日的现有技术。

硫酸盐还原菌(Sulfate-Reducing Bacteria,SRB)是一类能将硫酸根离子及其它氧化态硫还原为硫化物并从中获取能量的一类兼性厌氧微生物。硫酸盐还原菌生命力顽强，广泛分布于自然界中，常见于土壤、海洋及油田管道中，同时硫酸盐还原菌也是腐蚀性最强，且分布最为广泛的一种微生物。硫酸盐还原菌种类繁多，目前报道的有就有多达13个属，40余种。据研究，喷气燃料中的污染硫酸盐还原菌以脱硫弧菌属(Desulfovibrio)及更为耐氧的脱硫肠状菌属(Desufotomaculum)为主，喷气燃料中的硫酸盐还原菌污染对喷气燃料质量有较大影响，会导致喷气燃料腐蚀性加剧，引起银片腐蚀不合格。

目前硫酸盐还原菌最常用的检测方法为最大可能数法(MPN)，MPN法是一种基于培养法的方法，检测准确度高，检测限低，但其检测周期一般在30天左右，耗时长不适用于快速检测。同时还有一些基于SRB特征物质的检测方法如硫离子选择性电极测定法，或基于SRB细胞检测方法如荧光抗体技术，以及基于SRB遗传信息的检测方法如聚合酶链式反应(PCR)方法等。但以上方法都存在操作复杂或不适用于喷气燃料样本检测等问题，因此需要建立一种适用于现场快速检验，且方便操作的喷气燃料硫酸盐还原菌检测方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种、应用及检测方法，本发明的方法具有灵敏度高和特异性强的优点。

第一方面，本发明提供了一种检测硫酸盐还原菌的引物，包括：外引物F3和B3，内引物FIP和BIP，两条环引物LB和LF；

所述的外引物F3序列如SEQ ID NO.1所示，所述的外引物B3序列如SEQ ID NO.2所示，所述的内引物FIP序列如SEQ ID NO.3所示，所述的内引物BIP序列如SEQ ID NO.4所示，所述的环引物LB序列如SEQ ID NO.5所示，所述的环引物LF序列如SEQ ID NO.6所示。

进一步的，内引物FIP的5’端进行生物素标记，环引物LF的5’端进行异硫氰酸荧光素标记作为探针。

第二方面，本发明提供了一种硫酸盐还原菌检测方法，包括如下步骤：

以硫酸盐还原菌的基因组DNA作为模板进行扩增，LAMP反应体系引物浓度为：F3和B3各0.2μmol/L，FIP和BIP各1.6μmol/L，LF、LB各0.8μmol/L；LAMP预混液为，20mmol/LTris-HCl(pH 8.8)，10mmol/L KCl，8mmol/LMgSO₄，10mmol/L(NH4)₂SO₄，0.1％吐温20，0.8mol/LBetaine，1.4mmol/L dNTPs，8U/μLBst DNA聚合酶；