[发明专利]应用腺病毒转导制备能够表达人源ACE2转基因非人动物的方法，及所得动物的应用

权利要求书

1.应用腺病毒转导制备能够表达人源ACE2转基因非人动物的方法，其中该腺病毒由pShuttle-hACE2与pAdEasy-1重组得到的重组载体在AD293细胞中拯救得到，所述pShuttle-hACE2为插入有所述人源ACE2的DNA序列的pShuttle；

所述腺病毒在转导所述动物后，所述动物的呼吸道细胞表达人源ACE2蛋白。

2.根据权利要求1所述的方法，所述重组载体的构建方法包括：

将pAdEasy-1与线性化的pShuttle-hACE2共转化至BJ5183感受态细胞；

其中线性化的pShuttle-hACE2为所述pShuttle-hACE2由PmeI酶切位点断开得到。

3.根据权利要求2所述的方法，所述pAdEasy-1与所述线性化的pShuttle-hACE2以1:(1～5)的质量比共转化。

4.根据权利要求2所述的方法，转化后，将所述BJ5183感受态细胞培养8h～16h，随后挑选10～20个最小的单克隆接种至含Kana+的LB培养基培养≤8h。

5.根据权利要求1所述的方法，所述重组载体在XL-Blue感受态细胞中扩增后在AD293细胞中拯救腺病毒，将拯救得到病毒进行扩增与纯化。

6.根据权利要求5所述的方法，所述拯救腺病毒的步骤包括：

将所述AD293细胞在培养容器中培养至细胞融合度50％～70％后清洗，更换为Opti-MEM培养基，待细胞适应后将细胞转染液滴加至细胞培养液中转染3.5h～4.5h；

转染结束后换液培养至出现细胞病变，收集病毒；

其中，以所述培养容器为T75培养瓶计算，每瓶细胞的转染终体系中含有：

Opti-MEM培养基8.5mL～12.5mL、线性化的所述重组载体9μg～13μg、PEI 30μg～36μg。

7.根据权利要求1所述的方法，所述腺病毒在转导所述动物的方法为鼻腔滴注进行。

8.根据权利要求7所述的方法，所述鼻腔滴注的滴注量为(1～4)×10⁸FFU/(50μl～100μl)的腺病毒。

9.根据权利要求1～8任一项所述的方法，所述动物是啮齿类动物。

10.根据权利要求9所述的方法，所述动物是小鼠(Mus musculus)。

11.依照权利要求1～10任一项所述的方法获得的转基因非人动物在构建SARS-CoV-2感染疾病模型中的应用。

12.根据权利要求11所述的应用，所述动物同时鼻腔滴注SARS-CoV-2。

13.根据权利要求12所述的应用，所述鼻腔滴注SARS-CoV-2的量为(0.5～1.5)×10⁵PFU/(20μl～70μl)。