[发明专利]应用腺病毒转导制备能够表达人源ACE2转基因非人动物的方法，及所得动物的应用

说明书

本发明涉及动物模型领域，具体而言，涉及一种应用腺病毒转导制备能够表达人源ACE2转基因非人动物的方法，及所得动物的应用。其中该腺病毒由pShuttle‑hACE2与pAdEasy‑1重组得到的重组载体在AD293细胞中拯救得到，所述pShuttle‑hACE2为插入有所述人源ACE2的DNA序列的pShuttle；所述腺病毒在转导所述动物后，所述动物的呼吸道细胞表达人源ACE2蛋白。该方法具有快速，易于获得和制备等优点。

技术领域

本发明涉及动物模型领域，具体而言，涉及一种应用腺病毒转导制备能够表达人源ACE2转基因非人动物的方法，及所得动物的应用。

背景技术

人冠状病毒感染可引起轻微至严重呼吸道疾病。Severe Acute RespiratorySyndrome coronavirus(SARS-CoV)和Middle East Respiratory Syndrome coronavirus(MERS-CoV)是两种高致病性冠状病毒。2019年底爆发的新型冠状病毒SARS-CoV-2与SARS-CoV具有79.5％的同源性，传染性强，致死率比SARS-CoV低。动物模型对于致病机制的研究，疫苗和抗病毒药物的评估是必需的。

冠状病毒广泛感染哺乳动物和鸟类，它们的嗜性主要取决刺突(Spike，S)蛋白和细胞表面受体的结合，因此，受体分布决定了病毒的宿主范围和跨物种感染。一些冠状病毒采用细胞表面酶作为受体，比如229E使用氨基肽酶N(aminopeptidase N，APN)作为受体，SARS-CoV、NL63和SARS-CoV-2使用血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme2，ACE2)作为受体，MRES-CoV使用二肽基肽酶4(dipeptidyl peptidase 4，DPP4)为受体。申请人团队Zhao等人前期利用表达人源hDPP4的腺病毒转导小鼠构建MERS-CoV的动物模型，成功研发国际首个MERS小鼠模型，表明此种方法构建动物模型快速有效。

然而，本领域目前还未有操作周期短、操作简便，能够用于SARS-CoV-2感染小鼠的动物模型，其阻碍了关于此新病毒的研究，有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明涉及应用腺病毒转导制备能够表达人源ACE2转基因非人动物的方法，其中该腺病毒由pShuttle-hACE2与pAdEasy-1重组得到的重组载体在AD293细胞中拯救得到，所述pShuttle-hACE2为插入有所述人源ACE2的DNA序列的pShuttle；

所述腺病毒在转导所述动物后，所述动物的呼吸道细胞表达人源ACE2蛋白。

根据本发明的再一方面，本发明还涉及依照如上所述的方法获得的转基因非人动物在构建SARS-CoV-2感染疾病模型中的应用。

本发明利用pAdEasy系统将SARS-CoV-2受体基因人源ACE2重组至5型腺病毒载体，在AD293细胞中拯救Ad5-ACE2重组腺病毒，从而将腺病毒转导非人动物，使其呼吸道特别是肺部表达人ACE2受体，而后进行病毒感染。该SARS-CoV-2感染小鼠动物模型，可广泛应用于疫苗和治疗药物评估，以及致病机制研究。该方法具有快速，易于获得和制备等优点。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明一个实施例中利用pAdEasy系统成功构建重组腺病毒质粒Ad5-hACE2和Ad5-Empty的酶切鉴定结果；

图2为本发明一个实施例中CsCl纯化腺病毒Ad5-hACE2和Ad5-Empty结果；