[发明专利]一种单个外泌体的分离方法和核酸测序方法

说明书

本发明提供了一种单个外泌体的分离方法和核酸测序方法，属于生物检测技术领域，所述分离方法包括以下步骤：1)从体液中分离获得批量外泌体；2)将所述批量外泌体与油质液滴溶液混合获得混悬液；3)将所述混悬液用微流控通道进行分离获得单个液滴包裹的单个外泌体；所述油质液滴溶液中单个油质液滴的粒径为150～250nm。本发明所述方法操作简单，能够实现单个外泌体的分离以及核酸测序。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，尤其涉及一种单个外泌体的分离方法和核酸测序方法。

背景技术

外泌体(exosomes)是一种细胞向胞外空间分泌的直径大约为30～150nm的具有脂质双层膜的微小膜泡，不同来源外泌体大小也有一定的差异。外泌体广泛存在并分布于各种体液中，包括血液、眼泪、尿液、唾液、乳汁、腹水、脑脊液等；外泌体还可通过体液循环等途径到达其他细胞或组织。外泌体携带和传递重要的信号分子，通过在细胞间传递各种信号分子，参与细胞间通讯，从而调控多种生理过程。研究表明外泌体可能与多种疾病的发生和进程有关系。外泌体中富含核酸(microRNA、lncRNA、circRNA、mRNA、tRNA等)、蛋白、胆固醇等物质，这些物质通过外泌体实现在体内的转运。

目前分离外泌体的方法有超速离心法和超过滤法。分离获得的外泌体纯度不高，并且获得的是批量的外泌体，并不能获得单个外泌体。而不同来源的外泌体之间存在一定的异质性，常规的外泌体分离方法不能实现单细胞水平的外泌体分析。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种单个外泌体的分离方法和核酸测序方法，所述方法操作简单，能够实现单个外泌体的分离以及核酸测序。

本发明提供了一种单个外泌体的分离方法，包括以下步骤：1)从体液中分离获得批量外泌体；2)将所述批量外泌体与油质液滴溶液混合获得混悬液；3)将所述混悬液用微流控通道进行分离获得单个液滴包裹的单个外泌体；所述油质液滴溶液中单个油质液滴的粒径为150～250nm。

优选的，步骤2)中所述的批量外泌体与油质液滴溶液的体积比为1:(8～12)。

优选的，步骤2)中所述的批量外泌体与油质液滴溶液的体积比为1:10。

优选的，步骤2)中所述混合的温度为20～25℃。

优选的，步骤2)中所述混合的时间为4～8min。

优选的，步骤3)中所述的微流控通道为300nm级通道。

优选的，所述体液包括血液、眼泪、尿液、唾液、乳汁、腹水、脑脊液、鼻腔分泌物和阴道分泌物中的一种。

优选的，步骤1)中所述分离获得批量外泌体的方法包括超速离心法、超滤法、体积排阻色谱、微流控、亲和法和基于聚合物的共沉淀法中的一种。

本发明提供了一种单个外泌体的核酸测序方法，包括以下步骤：对所述的分离方法分离获得的单个外泌体进行建库测序或纳米孔测序。

本发明的有益效果：本发明提供了一种单个外泌体的分离方法，所述方法利用特定粒径的单个油质液滴包裹单个外泌体，然后再利用微流控技术分离单个油质液滴，实现单个外泌体的分离，操作简单，分离效果提升30％以上。

具体实施方式

本发明提供了一种单个外泌体的分离方法，包括以下步骤：1)从体液中分离获得批量外泌体；2)将所述批量外泌体与油质液滴溶液混合获得混悬液；3)将所述混悬液用微流控通道进行分离获得单个液滴包裹的单个外泌体；所述油质液滴溶液中单个油质液滴的粒径为150～250nm。