[发明专利]合成海藻糖的重组解脂耶氏酵母菌的构建方法

权利要求书

1.一种合成海藻糖的重组解脂耶氏酵母菌的构建方法，其特征在于，以能合成赤藓糖醇的解脂耶氏酵母作为海藻糖合成酶表达宿主，将海藻糖合成酶表面展示在该菌株表面获得重组菌株。

2.如权利要求1所述的合成海藻糖的重组解脂耶氏酵母菌的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：

S1、设计海藻糖合成酶基因表面展示表达盒，并合成该基因表达盒；

S2、将合成的海藻糖基因表面展示表达盒转化能合成赤藓糖醇的解脂耶氏酵母；

S3、筛选含有海藻糖基因表面展示表达盒的重组解脂耶氏酵母。

3.如权利要求2所述的合成海藻糖的重组解脂耶氏酵母菌的构建方法，其特征在于，所述海藻糖合成酶基因表面展示表达盒为含TreS编码序列的表达盒，包含同源臂DNA序列、启动子DNA序列、TreS基因编码序列、终止子DNA序列。

4.一种利用如权利要求1所述的方法构建得到的重组解脂耶氏酵母菌在合成海藻糖中的用途。

5.一种利用如权利要求1所述的方法构建得到的重组解脂耶氏酵母菌合成海藻糖的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

A1、将重组解脂耶氏酵母菌发酵葡萄糖合成赤藓糖醇；

A2、发酵结束后菌液分离得到含赤藓糖醇的发酵液以及酵母菌细胞；

A3、以该酵母菌细胞作为全细胞催化剂，转化麦芽糖合成海藻糖；

A4、在A3中的转化液中加入氮源和无机盐，接种酿酒酵母，发酵分解除海藻糖以外的杂质，或再加入糖化酶以分解未转化完的麦芽糖；

A5、从A4中分离纯化得到海藻糖。

6.如权利要求5所述的利用重组解脂耶氏酵母菌合成海藻糖的方法，其特征在于，步骤A3中，在所述酵母菌细胞中加入质量百分比浓度为10％～30％的麦芽糖水溶液，在温度30～50℃，pH 3.0～8.0条件下振荡或搅拌进行转化得到含有海藻糖的转化液。

7.如权利要求5所述的利用重组解脂耶氏酵母菌合成海藻糖的方法，其特征在于，步骤A4中的酿酒酵母能利用麦芽糖以及葡萄糖而不能利用产物海藻糖。

8.如权利要求5所述的利用重组解脂耶氏酵母菌合成海藻糖的方法，其特征在于，步骤A4中，所述酿酒酵母的接种量为1-5％。

9.如权利要求5所述的利用重组解脂耶氏酵母菌合成海藻糖的方法，其特征在于，步骤A4中，所述氮源为蛋白胨、酵母粉、酵母浸膏、玉米浆干粉、玉米浆、磷酸氢二铵中的一种或几种的混合；所述无机盐为硫酸镁、氯化锰、氯化铜中的一种或几种。

10.如权利要求9所述的利用重组解脂耶氏酵母菌合成海藻糖的方法，其特征在于，所述氮源的用量为5～25克/升；所述无机盐用量为0～2.5克/升。