[发明专利]一种踝关节创伤性骨关节炎模型造模角度固定器及其模型的构建方法

权利要求书

1.一种踝关节创伤性骨关节炎模型造模角度固定器，其特征在于：所述角度固定器为固定板（3.1）两端部分别固定连接截骨刀固定槽（3.2）和卡骨槽（3.3），截骨刀固定槽与卡骨槽端部成37°角连接；所述固定板（3.1）、截骨刀固定槽（3.2）和卡骨槽（3.3）形成三角形角度固定器。

2.根据权利要求1所述的一种踝关节创伤性骨关节炎模型造模角度固定器，其特征在于：所述截骨刀固定槽（3.2）为截骨刀固定板（3.4）两侧向三角形外延伸并向外折弯成C型固定片（3.5），所述卡骨槽（3.3）为骨固定板（3.6）两侧向外延伸并折弯呈“n”型；所述C型固定片之间的距离为5mm，所述固定板两侧的距离为5mm。

3.一种踝关节创伤性骨关节炎模型的构建方法，其特征在于：具体步骤如下：

（1）选择动物模型：选择2月龄雄性Sprague Dawley大鼠行右内踝骨折；

（2）动物麻醉后，踝关节准备实施无菌手术：大鼠取仰卧位，右髋关节外展90度，右膝关节弯曲90度；内踝行A 1cm纵行切口；随后，对浅、深筋膜和胫后肌腱进行钝性剥离，露出内踝；将截骨刀与角度固定器置入胫骨远端，并将其锤入内踝，直到阻力突然停止，角度固定器在内侧1/3胫距关节处形成一个可重复且稳定的骨折，微型手术钳夹住并摇晃骨折块，确保其完全骨折；

（3）闭合切口前，对骨折块进行压缩，解剖复位；切口逐层闭合；实验动物术后自由活动；术后镇痛采用0.03mg/kg盐酸丁丙诺啡连续三天镇痛；

（4）建模期间，定时进行X射线检测，骨折愈合和骨关节炎的变化在骨折八周后通过UltraFocus100 x-ray cabinet检测，软骨下骨、关节间隙和软骨的形态学变化通过X射线和番红-O进行检测；用荧光分子层析成像FMT、酶链免疫吸附实验ELISA法和免疫组化法检测OA相关生物标志物的蛋白水平，qPCR法检测OA相关基因的mRNA水平；

使用上述方法，通过八周的时间，在大鼠体上构建成踝关节创伤性骨关节炎模型。

4.根据权利要求3所述的一种踝关节创伤性骨关节炎模型的构建方法，其特征在于：所述UltraFocus100 x-ray cabinet检测，曝光时间为4s ,电压设定值约为30-40kv。

5.根据权利要求3所述的一种踝关节创伤性骨关节炎模型的构建方法，其特征在于：所述FMT监测关节内注射MMPSense680 24小时后体内的炎症水平，检测MMPs-3、MMPs-9和MMPs-13；使用ROI兴趣区分析确定踝关节内探针的picomolar浓度，并将测量区域限制在胫骨远端致距骨，以分离关节间隙。

6.根据权利要求3所述的一种踝关节创伤性骨关节炎模型的构建方法，其特征在于：实时定量PCR检测中，引物对如下：大鼠Col2al，正向：AAG-GGA-CAC-CGA-GGT-TTC-ACT-GG ；反向：GGG-CCT-GTT-TCT-CCT-GAG-CGT；大鼠Acan，正向：CAG-TGC-GAT-GCA-GGC-TGG-CT；反向：CCT-CCG-GCA-CTC-GTT-GGC-TG；大鼠MMP-13：正向：GGA-CCT-TCT-GGT-CTT-CTGGC；反向：GGA-TGC-TTA-GGG-TTG-GGG-TC；18sRNA, 正向：CGG-CTA-CCA-CAT-CCAAGG-AA；反向：GCT-GGA-ATT-ACC-GCG-GCT；根据公式x = 2-ΔΔCt，计算相对转录水平，其中ΔΔCt = ΔCtE-ΔCtC(ΔCtE = CtE - Ct18S, ΔCtC = CtC - Ct18S) ；数据报告为均数±标准差。

7.根据权利要求3所述的一种踝关节创伤性骨关节炎模型的构建方法，其特征在于：用重复测量的双向分组的方差分析评价统计学差异；采用Bonferroni post-test进行随机配对比较；结果用均数±标准差表示，P值小于0.05为有统计学意义；用GraphPad Prism5软件进行统计分析。