[发明专利]一种珠蛋白基因双表达慢病毒载体及其应用

权利要求书

1.一种连接肽基因，其特征在于，所述连接肽基因包括串联的P2A和T2A；

所述连接肽基因包括如SEQ ID NO:1所示的核酸序列。

2.一种融合基因，其特征在于，所述融合基因包括如权利要求1所述的连接肽基因；

所述融合基因包括如权利要求1所述的连接肽基因连接的第一HBB表达框和第二HBB表达框；或

所述融合基因包括如权利要求1所述的连接肽基因连接的第一HBB表达框和第一HBG2表达框；或

所述融合基因包括如权利要求1所述的连接肽基因连接的第一HBB表达框和第二HBG2表达框；

所述第一HBB表达框包括如SEQ ID NO:2所示的核酸序列；

所述第二HBB表达框包括如SEQ ID NO:3所示的核酸序列；

所述第一HBG2表达框包括如SEQ ID NO:4所示的核酸序列；

所述第二HBG2表达框包括如SEQ ID NO:5所示的核酸序列。

3.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包括如权利要求1所述的连接肽基因和/或如权利要求2所述的融合基因；

所述表达载体还包括DNase I高敏位点、启动子或终止子中的任意一种或至少两种的组合；

所述DNaseI高敏位点包括串联表达的HS4、HS3和HS2；

所述HS2包括如SEQ ID NO:6所示的核酸序列；

所述HS3包括如SEQ ID NO:7所示的核酸序列；

所述HS4包括如SEQ ID NO:8所示的核酸序列；

所述启动子包括如SEQ ID NO:9所示的核酸序列；

所述终止子包括如SEQ ID NO:10所示的核酸序列。

4.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体包括串联的HS4、HS3、HS2、HBB启动子、第一HBB表达框、连接肽基因、第二HBB表达框和终止子；或

所述表达载体包括串联的HS4、HS3、HS2、HBB启动子、第一HBB表达框、连接肽基因、第一HBG2表达框和终止子；或

所述表达载体包括串联的HS4、HS3、HS2、HBB启动子、第一HBB表达框、连接肽基因、第二HBG2表达框和终止子。

5.根据权利要求3或4所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体包括病毒载体；

所述病毒载体包括慢病毒载体、逆转录病毒载体或腺相关病毒载体中的任意一种。

6.根据权利要求5所述的表达载体，其特征在于，所述病毒载体为慢病毒载体。

7.一种重组慢病毒，其特征在于，所述重组慢病毒采用如权利要求3-6任一项所述的表达载体与包装辅助质粒共转染哺乳细胞制备得到。

8.根据权利要求7所述的重组慢病毒，其特征在于，所述哺乳细胞包括293细胞、293T细胞或293F细胞中的任意一种或至少两种的组合。

9.一种重组造血干细胞，其特征在于，所述重组造血干细胞包含如权利要求1所述的连接肽基因、如权利要求2所述的融合基因、如权利要求3-6任一项所述的表达载体或如权利要求7或8所述的重组慢病毒。

10.一种如权利要求9所述的重组造血干细胞的制备方法，其特征在于，所述方法包括将如权利要求1所述的连接肽基因、如权利要求2所述的融合基因、如权利要求3-6任一项所述的表达载体和/或如权利要求7或8所述的重组慢病毒导入造血干细胞的步骤。

11.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括如权利要求1所述的连接肽基因、如权利要求2所述的融合基因、如权利要求3-6任一项所述的表达载体、如权利要求7或8所述的重组慢病毒或如权利要求9所述的重组造血干细胞。