[发明专利]一种分离纯化柴胡地上部分总黄酮的方法

说明书

本发明公开了一种分离纯化柴胡地上部分总黄酮的方法，对NKA‑II大孔吸附树脂进行预处理，取柴胡地上部分，粉碎过筛，乙醇加热回流提取，减压浓缩成干浸膏，蒸馏水溶解；取NKA‑II大孔吸附树脂3g湿法装柱，稀释样品溶液，上样，树脂柱饱和，然后用乙醇进行解吸附，收集解吸液，稀释定容，测定总黄酮含量。本发明首次采用NKA‑II大孔吸附树脂对柴胡地上部分总黄酮的分离纯化工艺进行了系统的研究，优化改进提取工艺，提升总黄酮的提取含量，本发明工艺操作简单，便于工业化生产。

技术领域

本发明涉及分离纯化总黄酮的技术领域，更具体的说是涉及一种分离纯化柴胡地上部分总黄酮的方法。

背景技术

柴胡来源于伞形科柴胡属植物，为常用中药，在我国已有2000多年的应用历史，柴胡味辛、苦，性微寒，具有疏散退热、舒肝升阳之功效，主治感冒发热、寒热往来、疟疾、月经不调及子宫脱垂等症。现代药理研究证明柴胡具有解热、镇痛、镇静、抗炎、保肝利胆、抗菌、抗病毒及抗肿瘤等作用。

由于柴胡的功效显著为常用中药材，而长期盲目采挖已使野生资源频危，目前人工种植柴胡已取得了成功。经资料查阅发现柴胡地上部分黄酮含量要远高于地下部分，但目前柴胡的药用部位是根，为了更好地利用资源，扩大柴胡的药用部位，对柴胡地上部分总黄酮类成分的提取分离工艺进行研究，以期为柴胡的进一步开发利用提供理论依据。

大孔吸附树脂是一类新型高分子聚合物,它具有物理化学稳定性高、吸附选择性独特、不受无机物存在的影响、再生简便、解吸条件温和、使用周期长、宜于构成闭路循环、节省费用等诸多优点，其在生产中的应用日趋广泛，尤其在分离纯化植物活性成分方面显示出极大的优越性，是今后制药行业发展的趋势。因此，利用大孔吸附树脂对柴胡地上部分总黄酮进行分离纯化更有利于其工业化发展。

因此，提供一种分离纯化柴胡地上部分总黄酮的方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种分离纯化柴胡地上部分总黄酮的方法。经过对12种不同类型的大孔树脂对柴胡地上部分总黄酮类化合物进行分离纯化，发现NKA-II大孔吸附树脂对柴胡地上部分总黄酮的吸附及洗脱效果更好。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种分离纯化柴胡地上部分总黄酮的方法，具体步骤如下：

S1、预处理NKA-II大孔吸附树脂：取适量NKA-II大孔吸附树脂放入具塞的三角瓶中，加入95％的乙醇，室温条件下浸泡24h，装入色谱柱，用95％的乙醇以2BV/h的流速过柱，至最后流出液与水按体积比1:5混合不浑浊时，用蒸馏水洗至洗出液无乙醇味，备用；

S2、总黄酮的提取：取柴胡地上部分，自然晾干，粉碎过20-30目筛得到粗粉，用55％的乙醇，浸泡30-60min，静态加热回流提取3次，合并滤液，减压浓缩，得到样品溶液；

S3、总黄酮的吸附：取NKA-II大孔树脂3g湿法装柱，将S2的样品溶液用蒸馏水稀释，配置成样品含量为0.006-0.08mg/ml的溶液，加入色谱柱顶端进行上样2-18BV；

S4、总黄酮的解吸附：先用蒸馏水以2BV/h的流速洗涤色谱柱至α-萘酚浓硫酸反应无紫色环，然后再以乙醇为洗脱剂，进行解吸附，至洗脱流出液显色反应检测无色为止，收集解吸液。

S5、总黄酮的含量测量：用紫外分光光度计法测定各溶液需要测定的总黄酮的含量。

优选的，所述步骤S2中静态加热回流提取过程，每次粗粉与55％的乙醇的料液比为1:10-12。

优选的，所述步骤S3中湿法装柱的柱内树脂的直径：高度为1-4:5。

优选的，所述步骤S3中上样量为2-18BV。